蛋白纯化，只有一部分目的蛋白挂上柱子，western blot验证有his标签，

可能是缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ；流速过快、流动相粘度 (如乙醇等 )过高、温度过低。

可能原因 :缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞

可能是柱子性能不好了，或者没有选合适的柱子

应该就是蛋白量太高，你试一下显影的时候把参数调低或者下一次跑的时候降低上样量。