蛋白诱导时间如何确定？IPTG大家都用什么浓度？

我们一般用 0.5mg/ml IPTG.第一次没有做过的时候我是每隔 2h 超净台吸入 1ml 菌液，离心，加 loading 开水煮沸保存，2.4.8.10.12.16.18 的时间点，然后最后一次的全部离心，菌体保存在-80。然后将前面取得一起用 SDS-PAGE 进行凝胶电泳，考马斯亮蓝染色，自己的蛋白大概多大，根据 marker 看那个大小的地方有没有很粗的带，看哪个时间开始表达的最好，就能确定诱导时间了

IPTG配制成24 mg/ml（100 mM）

蛋白诱导时间，你要做预实验，因为取决于你的菌，温度，还有转速。可以梯度做一下看看，一般BL21DE3，37度，12-16个小时，200-250rpm，就可以，但是有的要降低温度，和速度，延长时间。

诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。

一、需要做实验确定，诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml，不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。

二、可以做一个梯度诱导，一般在菌浓OD600达到0.8－1.0的时候诱导。

三、培养两个小时候后，每隔一小时取样，大约在3－5小时的时候蛋白表达达到最高值，最后收菌后，加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验蛋白表达。

四、如果是酶的话就可以测定酶活确定，再跑SDS-PAGE胶检验溶解蛋白和包涵体的差异。

一般用1mM IPTG进行诱导，个人认为诱导浓度影响不大，主要是温度和诱导时间