免疫球蛋白纯化技术

1. 取正常人混合血清加等量生理盐水，于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50 ％饱和（NH4）2SO4]，4 ℃，3 小时以上，使其充分沉淀 2. 离心（3000 rpm）， 20 分钟，弃上清，以生理盐水溶解沉淀至X ml。再逐滴加饱和硫酸铵X/2 ml，置4 ℃，3 小时以上［此时（NH4）2SO4的饱和度为33 ％)］ 3. 重复上述第二步过程多次。将末次离心

1. 称DEAE-Sephadex A-50（下称A-50）5 克，悬于500 ml蒸馏水，1 小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5 N NaOH 15 ml的比例，将A-50浸泡于0.5 N NaOH中，搅匀，静置30 分钟，装入布氏漏斗（垫有2 层滤纸）中抽滤，并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性；再以0.5 N HCl同上操作过程处理，最后以0.5 N NaOH再处理一次。处理完后，将A-5

1. 用0.1 M PH8.0 磷酸缓冲液浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶，15 min。按1 g干胶200 ml上述缓冲液充分洗涤凝胶（用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤） 2. 装柱后用0.1 M PH8.0磷酸缓冲液平衡 　　　　　　　　　　　 3. 标本可用硫酸铵粗提物，先10000 g离心除去杂质，必要时用0.22 μm滤膜过滤。上样前用1 M PH9.0 Tris

1. 腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使终浓度为40 ％饱和硫酸铵搅拌20～30 min 2. 离心，沉淀用40 ％饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS，对缓冲液A（PH8.5 20 mM Tris缓冲液）透析除盐4 ℃过夜 3. 用带有1000 μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的TSK DEAE SP

1. rHuIFN-α2a的粗提 表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。 2. 亲和层析 rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15 mol/L PBS透析过夜，上样于经pH7.2，0.15 mol/L PBS平衡的亲和层析柱，流速0.5 ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1

Strep-tag®技术来源于德国IBA Lifesciences 公司。利用Strep-tag®技术，可纯化得到高纯度的Strep标签蛋白，杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌表达系统皆可使用。耐受不同的缓冲条件和添加剂（高盐、洗涤剂、还原剂、金属离子和螯合剂）。标签与配体间高达pM级的亲和力使得其不仅用于重组蛋白的纯化，更适用于蛋白质-蛋白质相互作用分析。

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