MinEluteDNA纯化技术

作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意��两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点连在一起，必须先切一个再切另一个，否则就切不动��因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个碱基，如果正好被切掉了就出问题。于是有人就到处找通用Buffer��其实所谓通用Buffer也只勉强适用于少数几个常用酶，而且往往会出现不是最佳反应条件的问题、星号活力问题��想想看，酶在生物体内精密调控各种反应，不是最适条件当然容易出问题��马虎一下有时就会有莫名其妙的结果，该切的切不动，不该切的切掉了，该连接的连不上，倒霉上一次就能浪费你几个月时间。于是我们一股脑的怨：酶有问题。可是如果两个酶分别切吧，费时间不说，切完一个，还要纯化好半天��就是不跑电泳也得酚氯仿抽提，本来就不多的样品这么一折腾，够呛。幸好如今有了试剂盒，一切都简单了。您别说，这试剂盒虽然花钱，原理也简单，可是用起来就是方便。第一次酶切后，只要5、6分钟可以很方便地快速纯化酶切样，不用酚抽不用乙醇沉淀，就可以进行第二次酶切，保证最佳反应条件，又何必煞费苦心的作双酶切呢，还可以减少一些人为的错误了。

MinElute DNA纯化技术是基于一种特殊的叫做Silica-gel-menbrane的膜，能够在高盐浓度的条件下迅速吸附DNA，在低盐或者纯水条件下释放DNA，只要短短几分钟，就能彻底除去包括引物、核苷酸、酶、矿物油、盐、琼脂糖、EB以及其它杂质，和以前QIAGEN的Silica-gel-menbrane有所不同的是，它要求的洗脱体积非常小，只要10微升，纯化的DNA是高度浓缩的，方便进行以后的反应。回收率在80%以上。

反应步骤非常简单，只要将Binding Buffer加入酶切样、PCR产物或者切下来的凝胶条中充分混匀，加入柱中离心，洗涤，用10微升ddH2O或Elution Buffer洗脱即可。纯化的产物可用于连接、标记、测序、杂交、酶切、显微注射、体外转录等后继实验。由于洗脱体积小，无需进一步浓缩也能保证很高的回收率。比如双酶切，可以在第一次酶切后将酶切样直接纯化，留下1、2微升电泳检测，剩下的7、8微升样品全部进行下一个酶切，非常方便，不会浪费样品。不过它的吸附范围是70bp到4kb，而不是以往的10kb。4kb以上的只能用以前的Qiaquick系列了，而10kb以上就该用QIAEX II系列。和以往一样，MinElute系列也分为PCR回收试剂盒、胶回收试剂盒、反应产物回收试剂盒可供选择。

记得一位回国访问的老师曾经说起，以前觉得美国学生笨，只会照着试剂盒123的作实验，没了说明书就不知如何是好，而中国学生聪明，能够灵活运用，可是如今发现中国学生有时太过灵活，省略不作对照、自作聪明地简化实验步骤，最后出了问题也找不到原因，反而不好。当时我们就说，没办法，都是没钱惹的祸，舍不得买试剂盒��能省就尽量将就一下，就是买了还要想办法节约一个对照，有时候就这么养成这种小家子气的习惯。回过头来想，真是：所谓“Research”就是要反反复复的“search”，不断失败，不断“search”，如果一下子就成功就不叫“Research”了，没有严谨良好的实验习惯就很难找到失败的原因，就很难做好Research。