CO2NN38
我蛋白过柱纯化,纯出来了,过柱的时候也没觉得buffer有异常,但是第二天发现我低浓度的咪唑洗脱液变得浑浊了,像长菌了一样……这会对我的蛋白活性有影响吗
buffer 是Pbs加20 40mM咪唑,比较奇怪的一点是高浓度的咪唑溶液都一切正常,而我的低浓度咪唑是由高浓度的稀释来的…
汤姆卜丽波
肯定有影响的,你纯化出来的蛋白跑胶看看大小对不对,有没有杂带,浑浊的就不要用了,下次注意操作时避免污染
loveliufudan
低浓度咪唑洗脱液变浑浊可能是因溶液制备或保存不当导致微生物污染所致。我的建议如下:
1. 这批变浑浊的低浓度咪唑洗脱液不建议继续使用,有微生物污染的风险。
2. 重新配置洗脱液,配制过程中注意操作的無菌条件,确保试剂无污染。
3. 配置好的洗脱液保存要避光密封,4°C冰箱保存,避免微生物生长。尽量使用1-2周内。
4. 如果纯化的蛋白没有直接接触变浑浊的洗脱液,仅过柱即可洗脱,对蛋白活性影响应该不大。
5. 但是最好进行活性测试,确保蛋白的活性未受影响。也可再次小规模过柱以洗脱掉任何污染物。
6. 以后操作时保持无菌条件,避免洗脱液受污染。
huarenqiang5
变浑浊蛋白处在不稳定的环境中或者自身不稳定,建议检查缓冲体系是否正确,环境是否低温,或在缓冲液中加入还原剂DTT。
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