【求助】如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？

请教：如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？

知道和裂解普通蛋白的buffer不一样了，要用TCA将蛋白沉淀下来除去，但是后续报道有用乙醚洗然后用60度氮蒸干的，但是这个我们实验室没有条件做，还有其他的后续处理方法么？

如果实验室有进口的探头式超声破碎仪的话，直接加PBS超声破碎悬浮细胞即可。有时要加磷酸二酯酶抑制剂。

贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer，有时要加磷酸二酯酶抑制剂。

关于是否需要乙酰化的问题，不同的试剂盒有不同的要求，主要取决于抗体是否灵敏，也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏，可以免去乙酰化的那一步，太容易引入误差。
另外，如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话，也没必要进行乙酰化，因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。

另外，Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒出售，不是基于ELISA法的，比ELISA法更方便。

我用的是125I的RIA kit，我们核同位素室的老师说，照常处理你的细胞，离心去上清后加入0.4ml 1M的高氯酸就可以了。不过要预实验一下，摸索浓度。
我这几天也在做细胞内cAMP和cGMP检测。

普通的Lysis buffer 就可以，但是你得加IBMX抑制PDE的活性。不知道你是想做western还是干吗？
如果你是要测cAMP的量，目前也有其他方法。

真的很不错啊啊

我看到的方法有两种：
1）一种是cayman公司提供的试剂盒说明书里讲到的：
用0.1M HCL裂解细胞（该试剂可以抑制内源的磷酸脂酶活性），室温孵育20分钟，然后用吸头轻轻的上下混匀几次将细胞裂解。接下来1000G 离心10分钟，取上清用于检测。（需要稀释至少2倍以上）
2）另一种是RND公司提供的试剂盒说明书里讲到的：
用试剂盒自带裂解液悬浮细胞至107CELLS/ML，然后采用-20度冻融循环几次，直至裂解后的细胞呈蓝色。600G 离心10分钟（4度），取上清用于检测。（需要稀释至少2倍以上）

请问用HCL裂解细胞会不会也破坏CAMP呢？

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