Strep 标签蛋白纯化 protocol

Strep-tag^® 技术来源于德国 IBA Lifesciences 公司。利用 Strep-tag^® 技术，可纯化得到高纯度的 Strep 标签蛋白，杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌表达系统皆可使用。耐受不同的缓冲条件和添加剂（高盐、洗涤剂、还原剂、金属离子和螯合剂）。标签与配体间高达 pM 级的亲和力使得其不仅用于重组蛋白的纯化，更适用于蛋白质-蛋白质相互作用分析。

Strep 标签纯化蛋白质的技术原理，是利用自然界中最强的非共价作用之一：生物素（biotin）和链霉亲和素（streptavidin）之间的相互作用。将链霉亲和素改进后，就得到了非常稳定的 Strep-Tactin^®。Strep-Tactin^® 同样也是一种蛋白质，能高效且可逆的结合短肽标签 Strep-tag^®，而且保留了结合生物素的能力。生物素加入后，会作为特异性的竞争剂，洗脱 Strep 标签蛋白。

1. 高达pM 范围的亲和力（K_D up to 6.2 x 10^-11 M）；
2. 纯化树脂材质稳定；
3. 小标签（8～28 aa）无需移除，不影响蛋白折叠和功能；
4. 极高的蛋白纯度（纯度＞ 95%）；
5. 应用于多种目标蛋白检测系统：Western blot，ELISA，免疫荧光，FACS等；
6. 兼容多种缓冲条件：高盐，洗涤剂，金属离子，螯合剂，还原剂；
7. 适用于多种蛋白的纯化，如膜蛋白、金属蛋白，低丰度蛋白等；
8. Twin-Strep-tag^®标签蛋白固定在界面上时（SPR，BLI）蛋白不易脱落。

Strep 标签纯化系统包含两个标签，8 个氨基酸链 Strep-tag^®II（氨基酸序列：WSHPQFEK）和 Twin-Strep-tag^®（氨基酸序列：WSHPQFEK-GGGSGGGSGG-SA-WSHPQFEK），

一般来说，这两个标签都不会干扰目标蛋白的折叠或生物活性，也不与重金属离子缓冲杂质反应，不具有离子交换性质不诱导蛋白质聚集。因此，蛋白纯化时可不必除去 Strep 标签。

图 1

配体介绍

搭配 Strep 标签进行蛋白纯化的配体有 2 种：Strep-Tactin^® 和 Strep-Tactin^® XT，都可以结合 2 种 Strep 标签（注：Strep-tag^® II 也能与 Strep-Tactin^® XT 结合）。

图 2

Strep-Tactin^® 和 Strep-Tactin^® XT 均是优化过的链霉亲和素，为四聚体形式。每个单体的分子量为 13 kDa。总分子量为 52 kDa。标签 Twin-Strep-tag^® 和配体 Strep-Tactin^® XT 的结合亲和力高达 pM，非常适合于在 ELISA 或 SPR 等分析应用中对蛋白质进行固定和检测。

实验步骤之一：Strep-Tactin^®

实验步骤之二：Strep-Tactin^® XT