纯化 Strep-Tag® 融合蛋白

IBA 第三代 Strep-tag® 高效蛋白纯化系统，由 Twin-Strep-tag® 搭配全新研发出的 Strep-Tactin®XT 组合而成。在此系统中，Strep-Tactin®XT 与 Twin-Strep-tag® 的亲和力提升至 pM 的范围，与 Strep-tag®II 的亲和力也已升至 nM 的范围。

亲和力大幅改善，其间的链结仍保有可逆性，纯化过程同样温和。仅需简单直接的再生步骤，填料即可重复利用。Strep-Tactin®XT 提升的亲和力能确保您在温和的生理纯化条件下，经过快速的洗脱步骤，得到高纯度、高浓度的目标蛋白 (> 95%) 。

Strep-Tactin® 与 Strep-Tactin®XT 纯化流程的差异主要在于：

• 将靶蛋白从 Strep-Tactin®XT 洗脱时，需使用含有 50 mM Biotin (生物素) 的 Buffer BXT (由于亲和力大幅提升，Desthiobiotin 不能有效的洗脱靶蛋白。)

• 再生 Strep-Tactin®XT Superflow® 填料时，需使用 10 mM NaOH (因使用生物素进行洗脱，HABA 无法与生物素进行竞争，需以 NaOH 进行再生。但之后仍可使用 HABA 检验填料是否成功再生。)

Strep-Tactin®/Strep-Tactin®XT 纯化操作步骤：

所有的步骤应在适合您融合蛋白的温度中进行 (4°C 至 25°C 之间)。为了获得最好的纯化效果，请依照指示的容量及比例进行操作 (如: 柱床体积、清洗缓冲液的多寡等)。当蛋白表达量少时，请勿改变其他缓冲液用量，而是加入更多的细胞提取液，以完整利用柱体中填料的载量。

下表为使用二代或三代填料，对标准纯化步骤进行比较 (以 Twin-Strep-tag®-mCherry 为例，左方纯化柱为 Gravity flow Strep-Tactin® Superflow® column，#2-1207-001；右方为 Gravity flow Strep-Tactin®XT Superflow® column，#2-4012-001)。

检验 Strep-Tactin®/Strep-Tactin®XT 的纯化结果

纯化完成后，使用 SDS-PAGE 分析所收集的不同样本，图 A 为 Strep-Tactin®或 Strep-Tactin®XT 分别纯化 Twin-Strep-tag®-mCherry 荧光蛋白的结果。

从中可见，两者所纯化出的蛋白纯度都很高 (下方条带为目标蛋白的降解物，非杂质)，使用二代 Strep-Tactin®在清洗杂质的步骤会损失少量目标蛋白。若细菌裂解液中杂质比较多，需要多次清洗，则更适用三代。

另外，我们也针对几种不同蛋白的纯化表现进行了比较 ，平均而言，三代抓取目标蛋白的效果约为二代的 1.5 倍。

因此，整体来看，两款填料都能纯化出高纯度的目标蛋白，并且三代 Strep-Tactin®XT 与 Twin-Strep-tag®有着更高亲和力，具备更多的优势：能耐受多次清洗，且目标蛋白得率更高，是个高效便利的蛋白纯化系统。