原理
重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90 ％以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1，与CNBr活化的Sepharose 4B交联制成亲和层析柱，经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能，达到了国内外同类McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b结合，故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。
材料与仪器
rHuIFN-α2a
盐酸
层析柱 凝胶柱
盐酸
层析柱 凝胶柱
步骤
1. rHuIFN-α2a的粗提
表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。
2. 亲和层析
rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15 mol/L PBS透析过夜，上样于经pH7.2，0.15 mol/L PBS平衡的亲和层析柱，流速0.5 ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1 mol/L甘氨酸-HC1洗脱，洗脱液立即转至pH7.2，0.15 mol/LPBS中透析过夜，测定蛋白浓度、纯度和活性。
表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。
2. 亲和层析
rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15 mol/L PBS透析过夜，上样于经pH7.2，0.15 mol/L PBS平衡的亲和层析柱，流速0.5 ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1 mol/L甘氨酸-HC1洗脱，洗脱液立即转至pH7.2，0.15 mol/LPBS中透析过夜，测定蛋白浓度、纯度和活性。
注意事项
一、保存方法
1. 亲和柱的再生
先后用10个柱床体积、含0.5 mol/L NaCl的pH8.5，0.1 mol/L Tris-HCl和pH4.5，0.1 mol/L醋酸钠缓冲液流洗亲和柱，再用pH7.2，0.15 mol/L PBS充分平衡。
先后用10个柱床体积、含0.5 mol/L NaCl的pH8.5，0.1 mol/L Tris-HCl和pH4.5，0.1 mol/L醋酸钠缓冲液流洗亲和柱，再用pH7.2，0.15 mol/L PBS充分平衡。
2. 贮存
加入1 /万的叠氮钠防腐，贮存于4 ℃冰箱。
加入1 /万的叠氮钠防腐，贮存于4 ℃冰箱。
来源：丁香实验
