单克隆抗体(McAb)亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素(rHuIFN-α2a)

　　重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的 细胞因子 新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90％以上,因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1,与CNBr活化的Sepharose 4B交联制成亲和层析柱,经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能，达到了国内外同类McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b结合，故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。
　　一、性能指标
　　1. McAb的特性：IgG1,间接ELISA效价10-7,对rHuIFN-α2a具中和活性。
　　2. 洗脱的rHuIFN-α2a纯度：〉90％。
　　3. 洗脱的rHuIFN-α2a比活性：≥1×109IU/mg。
　　4. rHuIFN-α2a的回收率：≥95％。
　　5. 亲和柱的稳定性：4℃操作和保存情况下，使用60余次1年时间性能无明显下降。
　　6. 与国外McAb比较：各项指标绝不亚于英国Celltech公司生产的McAb NK2。
　　二、操作方法
　　1. rHuIFN-α2a的粗提：表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。
　　2. 亲和层析：rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15mol/L PBS透析过夜,上样于经pH7.2，0.15mol/L PBS平衡的亲和层析柱，流速0.5ml/分,然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02,再用pH2.4,0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脱,洗脱液立即转至pH7.2，0.15mol/LPBS中透析过夜，测定蛋白浓度、纯度和活性。
　　三、保存方法
　　1. 亲和柱的再生：先后用10个柱床体积、含0.5mol/L NaCl的pH8.5,0.1mol/L Tris -HCl和pH4.5,0.1mol/L醋酸钠 缓冲液 流洗亲和柱，再用pH7.2,0.15mol/L PBS充分平衡。
　　2. 贮存：加入1/万的叠氮钠防腐，贮存于4℃冰箱。