质粒在DH5α里 长，但在DH10α里不长呢？
dxy_ai11ha80
质粒在DH5α里➕amp可以正常生长，但在DH10α里➕amp,kana,庆大霉素，四环素没有斑点，连蓝斑都没有，这种情况为什么呢，我应该怎样做呢？（质粒与感受态都没有问题）
2 个回答
土井挞克树
降低庆大霉素和四环素的浓度再培养。
loveliufudan
DH10a转化后没有任何斑点，包括蓝色和白色斑点，这种情况可能有以下几种可能性：
感受态细胞存储或处理不当，导致转化率较低。在进行质粒转化前，感受态细胞的存储条件和处理方法需要符合实验要求，如冷冻保存时需要使用适当的细胞冻存液，解冻时需要采取适当的方法，如快速浸入42℃水浴中使细胞迅速解冻，并迅速加入培养基中；
质粒的抗性基因在DH10a中表达受阻，导致无法正常筛选出转化成功的细胞。此时可以考虑使用其他含有不同抗性基因的质粒进行转化筛选，或者尝试将该质粒转化至其他菌株中进行筛选，观察转化效率是否受影响；
筛选条件不当，如抗性药物的浓度过高或过低、筛选时间过短等。在进行质粒筛选时，需要选择适当的抗性药物浓度和筛选时间，以保证转化细胞的生长和扩增。
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