确定G418最佳筛选浓度用什么细胞

tjmedwnn：确定G418最佳筛选浓度用什么细胞？

大家好，我现在做实验，用G418抗性的逆转录病毒包装系统收获病毒液做稳定转染，第一步需要用PT67细胞包装收获病毒液，说明书上说质粒转入PT67细胞后要用G418做筛选，之前需要用不同浓度的G418做一个最佳筛选浓度试验。请教大家，用来做确定最佳浓度试验的PT67细胞是用未经过任何处理的PT67细胞呢还是用已经转染过的PT67细胞？？

另外收获病毒液后我需要用其转染干细胞，转染后同样需要用G418筛选，问题同上，首先做确定最佳G418浓度试验，那是用未经过处理的干细胞做还是经过转染的干细胞来做浓度确定试验啊！

我的师兄说是用转染过以后的PT67和干细胞来做最佳浓度确定试验，我不大理解，请大家指教啊！

谢谢了。。。。

丁香园网友little_snow认为：

PT67转染前就要用G418筛选出临界死亡浓度，转染后用筛出的G418的死亡浓度培养，再挑出克隆，做病毒滴度

丁香园网友tjmedwnn认为：

那就是说两次筛选都是用没有经过任何处理的PT67和干细胞来确定最佳G418筛选浓度了，是这样吗？

丁香园网友little_snow认为：

应该是三次，测病毒滴度的细胞（如NIH3T3）也要确定G418的筛选浓度。

每种细胞对G418的敏感性不同，不同厂家不同批次的G418对细胞的敏感性也不同。理论上讲，配一次G418，都要重新做过浓度筛选。