质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗

相关专题

 

问：跟文献上的细胞一样，但跟他的质粒不一样，文献上说G418筛选浓度为500mg/ml，那我可以直接用这个浓度筛选我转染 以后的浓度吗?质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗?

答：

由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。尽管文献上说特性明确的细胞系G418的最佳用量还是稳定的，但是由于实验室的培养方式、传代的影响，该细胞系的遗传性状是否稳定很难说，建议你还是重新摸索筛选一次吧，有些懒是偷不得的，还是要踏踏实实的做，摸索方法还是很简单的：将细胞稀释至1000Cell /ml，每孔100μl加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释至0,，100，200，300，400，500，600，700，800，900，1000，1100μg/ml等12个级别，培养10-14天，以最低细胞全部死亡浓度为基准，一般400-800左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持使用筛选浓度的一半。

不同的质粒转染 同一种细胞，筛选的G418浓度是一样的，但是否都能筛选得到稳定株就很难说了，祝你好运!