质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗
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问:跟文献上的细胞一样,但跟他的质粒 不一样,文献上说G418筛选浓度为500mg/ml,那我可以直接用这个浓度筛选我转染以后的浓度吗?质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗?
答:
由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同,所以在筛选之前,一定要确定G418的最佳筛选浓度。尽管文献上说特性明确的细胞系G418的最佳用量还是稳定的,但是由于实验室的培养方式、传代的影响,该细胞系的遗传性状是否稳定很难说,建议你还是重新摸索筛选一次吧,有些懒是偷不得的,还是要踏踏实实的做,摸索方法还是很简单的:将细胞稀释至1000Cell /ml,每孔100μl加入有培养基的24孔板,将每孔中的G418浓度稀释至0,,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100μg/ml等12个级别,培养10-14天,以最低细胞全部死亡浓度为基准,一般400-800左右,筛选时比该浓度再高一个级别,维持使用筛选浓度的一半。
不同的质粒转染同一种细胞,筛选的G418浓度是一样的,但是否都能筛选得到稳定株就很难说了,祝你好运!