稳定表达某种蛋白的293T细胞培养时加入的G418浓度是多少，要用筛选浓度吗，还是维持浓度就行？

HEK293T细胞有G418抗性，是筛不出稳转细胞系的。换个细胞系或者质粒换个抗性吧。

稳定表达时加入维持浓度，后续提取加入筛选浓度

通常G418筛选293细胞用药400-1000ug/ml。不过你最好在筛选之前做一个细胞耐药曲线，观察你用293细胞对不同浓度G418的耐受性。最高浓度要超过1000ug/ml，最低浓度要低于400ug/ml，甚至可以到0。以确定至少需要多大浓度的G418能把293全部杀死，然后用这个浓度G418进行正式筛选。有这样的耐药曲线，你后面的实验会省很多事情。

筛选完成后，就可以使用维持浓度了

不用筛选浓度，维持浓度就行了。

G418是一种常用的选择性抗生素，常用于筛选携带耐药基因的细胞。在稳定表达某种蛋白的293T细胞培养中，G418的浓度应该根据实验需要进行优化，一般浓度在200-1000μg/mL之间。通常，建议在初次筛选时使用较高浓度（例如800-1000μg/mL），以确保对非转染细胞的杀伤效果。如果需要维持表达，则可以将G418的浓度降至较低水平（例如200-400μg/mL）。

对于初次筛选，建议使用逐步增加G418浓度的方法进行筛选。例如，在初始培养过程中，使用较低的G418浓度（例如200-400μg/mL），然后每几天增加G418浓度，直到最终达到所需的浓度。在筛选过程中，还应注意观察细胞的生长状态，确保G418的浓度足够杀死非转染细胞，但不会对转染细胞产生明显的毒性影响。

当确定了G418的最佳浓度后，可以维持该浓度进行长期培养。然而，应该定期检查细胞的G418敏感性和稳定性，以确保耐药性基因的稳定表达。