原理
培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代，悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。
材料与仪器
器材：
净化工作台、离心机、恒温水浴箱、冰箱
倒置相差显微镜、培养箱、吸管
玻璃瓶、培养瓶、废液缸、吸头、枪头
胶塞、离心管、加样枪、红血球计数板
试剂：
细胞 D-Hanks 液、小牛血清、RPMI1640
双抗、胰蛋白酶、EDTA、NHCl
NaHCO3
步骤
1. 贴壁细胞的消化法传代：
（1）吸除或倒掉瓶内旧培养液；
（2）D-Hanks 液洗 2~3 次；
（3）向瓶内加入适量消化液（胰蛋白酶或与 EDTA 混合液）轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面；
（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加适量新的消化液，轻轻摇动再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化（也可不采用上述步骤直接加消化液进行消化）；
（5）消化最好在 37 ℃ 或室温 25 ℃ 以上环境下进行；
（6）消化 2~5 min 后把培养瓶放置显微镜下进行观察，发现胞质回缩，细胞间隙增大后，应立即终止消化；
（7）吸除或倒掉消化液，如用 EDTA 消化，需加 Hanks 液数毫升，轻轻转动培养瓶把残留消化液冲掉；
（8）再加培养液。如仅用胰蛋白酶可直接加少许含血清的培养液，终止消化；
（9）用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行；
（10）从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到，使细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔不要用力过猛；
（11）计数，分别接种在新的培养瓶内；
2. 悬浮细胞的传代：
悬浮细胞传代可离心收集细胞后传代，或直接传代；离心传代法：
（1）将细胞连同培养液一并转移到 15 ml 离心管内；
（2）离心 800~1000 rpm，5 min；
（3）弃去上清，加新的培养液到离心管内，用吸管吹打形成细胞悬液；
（4）计数，分别接种在新的培养瓶内；
（5）直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清液吸掉 1/2~2/3 ，然后用吸管吹打形成细胞悬液后再传代。
3. 部分贴壁细胞的传代
（1）部分贴壁不牢的细胞，如 Hela 细胞等，不经消化处理直接吹打可使细胞从壁上脱落下来，而进行传代。
（2）对绝大部分贴壁生长的细胞，因直接吹打对细胞损伤较大，细胞常有较大数量的丢失，因而需消化后，才能吹打传代。
注意事项
（1） 胰蛋白酶要预温，温度 37 ℃ 左右为宜。
（2） 离心转速要合适，转速过低，不能有效分离细胞，离心速度过大，时间过长，会挤压细胞造成损伤甚至死亡。
（3） 要定时观察细胞，发现污染，应及时处理。
常见问题
根据细胞生长的恃点，传代方法有 3 种：悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）、贴壁生长细胞传代。
培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。
来源：丁香实验
