常用的细胞固定液有哪些？

1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟，干燥。

2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。

3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细胞和细胞涂片的固定，平时丙酮4℃低温保存备用，临用时，将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟，取出后自然于燥。

4．乙醇 95％乙醇脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不宜过长（2小时内）。乙醇使蛋白变性程度轻，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育时间长的情况下，抗原可流失，并减弱反应强度。

5．乙醚（或三氯甲烷） 与乙醇等量混合对组织穿透性极强，即使涂片上含较多的黏液，固定效果仍较好，是理想的细胞固定液。

福尔马林，卡诺氏液，封片剂，乙醛，4%多聚甲醛。

95%酒精，乙醚酒精液，甲醇，5%冰醋酸，无水酒精，丙酮等

1.

4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10―20分钟,干燥。

2.

甲醇 10‰甲醇固定5―20分钟,自然干燥。

3.

丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细胞和细胞涂片的固定,平时丙酮4℃低温保存备用,临用时,将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟,取出后自然于燥。

。一般要用缓冲液，平衡盐水，抗生素溶液，血清，实验室常用合成培养基。

甲醛:常用浓度4％、乙醛、环氧乙烷、点红。植物细胞也有用乙醇固定的

95%乙醇是最常用的细胞学快速固定液

甲醇固定时间快，细胞收缩小，细胞核保存较小

常用的细胞固定液有95％乙醇、甲醛。

福尔马林，瑞氏染色，伊红。美兰，亚甲蓝

细胞常用的几种固定液

(1)酒精：有固定、硬化和脱水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但对核蛋白固定效果较差(亲和力小且易自溶)。酒精固定的特点是杀死快，渗透力强，对组织收缩较大(可收缩20%左右)，可使材料变硬。酒精常用于混合固定液中，但由于它本身是一种还原剂，很容易氧化成乙醛，甚至氧化成醋酸，因此不与三氧化铬、重铬酸钾及锇酸等氧化剂配合使用。但与甲醛、醋酸或丙酸配合，用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂，故不宜用来固定脂类材料。

(2)甲醛水溶液：甲醛在水中的溶解度为37-40%，渗透力强，固定均匀，对组织收缩作用小，一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降，因形成三聚甲醛而失效。

(3)冰醋酸：纯醋酸在温度稍变低时即形成冰晶，所以又称为冰醋酸。常用0.3-0.5%的浓度作为固定液。冰醋酸对材料有膨胀作用，对核蛋白固定好，可与水、酒精混合。

(4)AF液：90ml乙醇+10ml甲醛 用于固定大块组织。

(5)卡诺氏固定液： 冰醋酸::无水乙醇=1:3:6

改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3

一般都用PBS配制4％多聚甲醛来固定细胞

1.95%乙醇是最常用的细胞学快速固定液。此固定液适用于HE染色和巴氏染色，在细胞细节表现上略差于甲醇。2.甲醇固定时间快，细胞收缩小，细胞核保存较好，结构清晰，染色鲜艳，常作为液基细胞特别是穿刺细胞涂片的固定液。3.冰乙酸醇固定液能沉淀核蛋白，渗透性强，固定快，常与其他溶液混合使用。4.无水乙醇对糖原保存较好，容易使细胞收缩，很少单独使用，一般只用于需要做糖原染色的涂片的固定。5.Carnoy液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于染色体的固定，常用于糖原及尼氏体的固定。

以下是一些常用的细胞固定液：

95%乙醇

甲醇

丙酮

多聚甲醛

这些固定液可以用于不同类型的细胞，包括培养细胞和组织切片，并且它们具有不同的特点和用途。例如，95%乙醇是一种常用的细胞学快速固定液，能够使蛋白质凝固，引起细胞收缩，并在染色后显示出清晰的细胞核结构。甲醇具有快速固定和收缩细胞的作用，常用于液基细胞涂片的固定。丙酮也常用于细胞学研究中，能够固定细胞并使蛋白质沉淀。多聚甲醛是一种常用的固定剂，适用于需要保持细胞形态的情况。

多聚甲醛，酒精，甲醇，异丙醇都可以

4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇、95%乙醇

1. 4%多聚甲醛溶液
2. 丙酮溶液
3. 甲醇
4. 戊二醛
5. 糖原固定液

4％多聚甲醛，10％福尔马林，甲醛蔗糖固定液

1、4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.3）

试剂：多聚甲醛 40g

0.1mol/L 磷酸缓冲液 至1000ml

2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠

试剂：A 液：多聚甲醛 40g

蒸馏水 400ml

B 液：Na2HPO4·2H2O 16.88g

蒸馏水 300ml

C 液：NaOH 3.86g

3、Bouin’s 液及改良Bouin’s 液

试剂：饱和苦味酸

40%甲醛 250ml

冰醋酸 50ml

4、Zamboni’s(Stefanini’s)液

试剂：多聚甲醛 20g

饱和苦味酸 150ml

Karasson-Schwlt’s PB 至1000ml

5 、PLP 液

PLP 液 即 过 碘 酸 盐- 赖 氨 酸- 多 聚 甲 醛 固 定 液（Periodate-Lysine-paraform-alde－hyde fixative）

试剂：过碘酸钠

赖氨酸盐酸盐（或盐酸赖氨酸）：

多聚甲醛

蒸馏

6、Karnovsky’s 液（pH7.3）

试剂：多聚甲醛 30g

25%戊二醛 80ml

0.1mol/L PB 至1000ml

7、0.4% 对苯醌 （Parabenzoquinone）

试剂：对苯醌 4.0g

0.01mol/L PBS 1000ml

配制方法：称取4.0g 对苯溶于1000ml 0.01mol/L 的PBS 即可。

8、PFG 液（Parabenzoquinone-Formaldehyde-Glutaraldehyde fixative, PFG）

试剂：对苯醌 20g

多聚甲醛 15g

25%戊二醛 40ml

0.1 mol/L 二甲酸钠缓冲液 至

9、碳二亚酰胺-戊二醛（ECD-G）液

试剂：0.05mol/LPB 500ml

0.01mol/L PBS 500ml

Tris 约14g

浓HCl 少许

ECD 10g

25%戊二醛 3.5ml

10、四氧化锇（锇酸Osmic Acid, OsO4）

以上介绍了目前免疫细胞化学中常用的一些固定液。关于固定液种类还很多，如70%～90%的酒精、丙酮、醋酸酒精（含0.1%～1%醋酸的70%～90%的酒精等），这些溶液都能促使蛋白质凝固。

细胞常用的几种固定液

(1)酒精：有固定、硬化和脱水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但对核蛋白固定效果较差(亲和力小且易自溶)。酒精固定的特点是杀死快，渗透力强，对组织收缩较大(可收缩20%左右)，可使材料变硬。酒精常用于混合固定液中，但由于它本身是一种还原剂，很容易氧化成乙醛，甚至氧化成醋酸，因此不与三氧化铬、重铬酸钾及锇酸等氧化剂配合使用。但与甲醛、醋酸或丙酸配合，用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂，故不宜用来固定脂类材料。

(2)甲醛水溶液：甲醛在水中的溶解度为37-40%，渗透力强，固定均匀，对组织收缩作用小，一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降，因形成三聚甲醛而失效。

(3)冰醋酸：纯醋酸在温度稍变低时即形成冰晶，所以又称为冰醋酸。常用0.3-0.5%的浓度作为固定液。冰醋酸对材料有膨胀作用，对核蛋白固定好，可与水、酒精混合。

(4)AF液：90ml乙醇+10ml甲醛 用于固定大块组织。

(5)卡诺氏固定液： 冰醋酸::无水乙醇=1:3:6

改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3

95%酒精，乙醚酒精液，甲醇，5%冰醋酸，无水酒精，丙酮等