RAW264.7用LPS造模，时而成功时而失败，找不到原因，细胞都没有问题，大家都是怎么操作的呀

1.lps质量问题，看有没有过期？

2.浓度梯度摸索，以及孵育的时长，像我目前孵育浓度最高1.5微克每毫升，孵育时长最高24h

3.比较重要的一点，因为lps刺激raw264.7促进细胞极化，所以细胞培养过程中我选择不用胰酶消化，直接预冷pbs浸泡，细胞刮刀去刮落细胞传代

1.使用新鲜的LPS：LPS易受到氧化和降解，所以使用新鲜的LPS可能会更有效。

2.优化LPS浓度：使用不同浓度的LPS进行优化，通常使用较低的LPS浓度（如50-100 ng / mL）可能更容易成功。

3.改变细胞密度：调整细胞密度可能有助于提高LPS诱导的效率。 试试使用较高的细胞密度。

4.预处理细胞：使用IFN-γ等细胞活化剂可预处理细胞，这可能会提高细胞对LPS的敏感性。

5.改变LPS诱导时间：尝试在不同时间点诱导细胞，有时较长的LPS处理时间（如24小时）可能更有效。

6.检查培养条件：确保培养条件（如温度，CO2浓度等）符合细胞生长要求，这可能会影响LPS诱导的效果。

7.尝试其他细胞系：如果使用RAW264.7不起作用，请尝试其他类似的巨噬细胞系，如THP-1等。

LPS体外处理RAW264.7细胞,LPS浓度为1‑1000ng/ml,处理时间为4‑24h。要掌握好细胞和浓度

可能与以下几个因素有关：

LPS质量：LPS的质量可能会影响其激活RAW264.7巨噬细胞的效果。因此，在进行实验前，应仔细检查LPS的质量和浓度。可以使用内毒素检测试剂盒来测试LPS的纯度和内毒素水平。另外，LPS应当储存在冷冻器中，以保证其活性。

细胞密度：细胞密度可能会影响巨噬细胞对LPS的反应。过高或过低的细胞密度都可能会导致实验失败。因此，在进行实验前，应控制好细胞密度，通常建议将细胞密度控制在5×10^5-1×10^6个/毫升之间。

LPS处理时间：LPS处理时间应当恰当。处理时间过短可能导致细胞未能充分激活，处理时间过长可能导致细胞死亡。一般来说，处理时间应控制在4-24小时之间。

细胞培养条件：细胞培养条件可能会影响细胞的反应。因此，在进行实验前，应控制好细胞培养条件，包括培养基、温度、二氧化碳浓度、湿度等。

细胞状态：细胞状态可能会影响细胞对LPS的反应。细胞的存活率、健康程度等因素都可能会影响实验结果。因此，在进行实验前，应选择健康的、生长正常的细胞。

可能有以下原因:1.LPS浓度过低，2.作用时间过短，3.LPS来源不同，4.细胞数量不足，5.试剂不稳定性。