Raw264.7 巨噬细胞培养和传代

减少极化现象可以从以下方面考虑：

1. 传代时尽量避免过度吹打，以避免造成机械应力引起的异常活化和极化。

2. 将培养基中的M-CSF浓度控制在适宜范围内，不过度刺激细胞。同时，在培养基中加入一些抗极化因子，如IL-4、IL-10等，有助于减少极化现象。

3. 使用适宜的细胞培养条件，如适宜的pH值、温度、氧气浓度等，保证细胞在较为稳定的状态下生长。

4. 在培养过程中尽量保证培养器内的通气性和清洁度，避免细菌、真菌污染等因素对细胞生长的影响。

需要注意的是，RAW264.7细胞具有一定的极化倾向，但并不完全是M1或M2型细胞。因此，在培养过程中需注意区分M0、M1和M2等不同类型的巨噬细胞，并且根据实验需求进行相应的操作。

在培养时候，要注意培养时用的血清及培养基的选择，细胞密度在70％左右就可以传代，传代过程中，吹打时注意用枪时的力度及速度，保证吹打均匀，离心时，注意转速在800-1200rpm。

增加传代密度，缩短生长时间，一般我们长一天就能用（传代细胞数大概是1.5×10^6～2×10^6个，就一个T25瓶长满后1:3或1:4传代），不想铺板，就传稀疏点，两天传一次。

培养这个细胞，最需要注意的是两点，一个是细胞密度，它生长速度快，尤其是在酸性环境中，而且容易抱团，因此要保证足够的培养基，传代的时候建议离心。另外一个是传代不建议用胰酶消化，也不建议强烈吹打，推荐用细胞刮刀，轻柔倾斜着刮下来，养过一段时间都没问题

在接种细胞时保持一个适中的传代密度，避免其向终末细胞分化，要关注好细胞的汇合程度，控制好细胞的生长速度，不能等到叠加成层时才去传代。RAW264.7细胞传代后贴壁时间较短，半小时左右绝大部分细胞就能够贴下去，刚贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于培养皿中。生长一段时间后，部分细胞会变成类似四角形，伸出伪足之类的。这个时候就是在提醒你注意传代了，此时无论汇合度如何都需要进行传代了。改善细胞培养环境，例如与细胞接触的器皿保证无菌，使用质量较高的胎牛血清。

多次吹打，用pbs清洗，给细胞一定时间适应之后再进行传代

在培养MO RAW264.7细胞时，如果想减少极化现象，可以尝试以下几个方法：

优化培养基成分。选择适当的培养基成分，可以减少细胞极化的发生。可以根据细胞类型和实验要求调整培养基中营养物质、生长因子和激素等成分的浓度和种类。

控制细胞密度。细胞密度过高或过低都可能导致细胞极化。因此，在传代时要注意控制细胞密度，不要让细胞过于稀疏或过于紧密。

增加细胞接触面积。细胞极化的发生与细胞接触面积有关。因此，可以使用适当的培养皿和培养条件，增加细胞的接触面积，如使用培养皿底面积更大的瓶子、使用旋转培养器等。

不要使用过多的细胞子域。细胞子域可以激活特定的信号通路并促进细胞极化，因此可以尝试减少或避免使用过多的细胞子域。

此外，使用吹打手法传代而不使用胰酶也可以减少细胞极化的发生，因为胰酶消化会使细胞受到损伤，促进极化。但需要注意，吹打手法需要注意操作方法和力度，避免对细胞造成损伤。