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小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的消化及传代

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RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢,普通的方法根本就不可能将它消化下来,这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得,简介如下:

消化液:0.5%胰酶、0.2%EDTA,实验前加温到37度

以50ml培养瓶为例:

1、细胞贴壁生长,长满瓶底80%时,弃去培养液,加D-HANKS 漂洗 两次;

2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1-2ml,消化37℃约2-5min,镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化,弃消化液加D-HANKS 漂洗两次;

3、加入新培养液10ml复吹打混悬细胞,按需要分入 新的培养瓶;

4 、入37℃5%CO2孵箱,几小时后即可再贴壁 。

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