RAW264.7细胞株的传代
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我养的是RAW264.7细胞株,前面有战友都提到过这种细胞的消化传代,但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强, 每次传代都很难消化下来, 刚开始使用胰酶消化,发现37度, 消化15min细胞也还是吹不起来,后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法,但是这样养了一段时间,发现细胞损伤非常大,贴壁性变差,生长缓慢,后来使用了现在这个方法,到现在细胞的生长状况一直很好!
简述如下:
1) 将培养瓶内旧的培养液弃掉, 然后用D-Hanks液洗两次,(一定要洗干净,以免影响胰酶的消化作用)
2) 加入0.25%胰酶-EDTA消化,25cm培养瓶加0.4ml, 37度消化5min,镜下看到细胞变圆,间隙增大。
3)立即加含10%FCS的培养液终止消化,用细胞刮刀轻刮,注意,这时候用吸管吹不下来,但是刮刀却很容易刮下来,而且对细胞的损伤极小
4)离心,弃上清,加新的培养液(10%FCS),小心吹匀,分装入新的培养瓶
此法屡试不爽,细胞生长饱满圆润,再也没出现过以前那种情况。