16HBE14o－细胞株的传代

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。

正常情况下，2天换一次液,4-6天传代一次.

传代过程：

1、直接倒掉DMEM培基

2、pbs将细胞洗2次

3、倒掉pbs

4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶

5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟

6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。

7、加入完全培基/血清中止消化（我的做法是：不倒掉胰酶）

8、吹打：动作要快。按一定的顺序进行吹打，尤其是边缘和角落往往是16HBE14o－细胞长得最密的地方。如果不吹打彻底，会对下一次的传代造成影响。吹打时，我个人比较喜欢用较大的吸管，这样的话液体就很难进入倒吸耳球，减少污染的可能。

9、补足培养基，如有多瓶传代，移至同一培养瓶内，混匀细胞，分装传代。

如果急着做试验的话，通常1传2。如果不着急试验，通常可以1传3或者4。