怎么 RT－PCR 老不出结果

各位老师，师兄师姐好！我做小鼠stat1和ICAM－1的半定量RT－PCR，一开始自己设计引物，primer5 评分均为100分，stat-1那对引物第一次P出来了，条带很亮，无杂带，无引物二聚体，但从第二天开始就死活P不出来，ICAM－1还没P出来过，于是重新设计引物，primer5评分仍是很高，仍是死活P不出目的基因。内参倒是次次出现，条带从来都是很亮的。没办法只好用外文提供的引物，仍无结果。于是请同学用他的试剂盒试着P一下第一次P出来过的那对引物，操作也由他来操作，仍是只p出内参，我现在已是黔驴技穷，下一步我该怎么办，怎样找原因？如有哪位老师能提供经验证过的相关引物，不胜感激，谢谢！