我的PCR怎么不出结果

各位大侠：我是PCR新手，第一次作PCR，模板是含ANX A5的原核质粒。ANX A5的DNA全长如下ccatggcaca ggttctcaga ggcactgtga ctgacttccc tggatttgat
gagcgggctg atgcagaaac tcttcggaag gctatgaaag gcttgggcac agatgaggag
agcatcctga ctctgttgac atcccgaagt aatgctcagc gccaggaaat ctctgcagct
tttaagactc tgtttggcag ggatcttctg gatgacctga aatcagaact aactggaaaa
tttgaaaaat taattgtggc tctgatgaaa ccctctcggc tttatgatgc ttatgaactg
aaacatgcct tgaagggagc tggaacaaat gaaaaagtac tgacagaaat tattgcttca
aggacacctg aagaactgag agccatcaaa caagtttatg aagaagaata tggctcaagc
ctggaagatg acgtggtggg ggacacttca gggtactacc agcggatgtt ggtggttctc
cttcaggcta acagagaccc tgatgctgga attgatgaag ctcaagttga acaagatgct
caggctttat ttcaggctgg agaacttaaa tgggggacag atgaagaaaa gtttatcacc
atctttggaa cacgaagtgt gtctcatttg agaaaggtgt ttgacaagta catgactata
tcaggatttc aaattgagga aaccattgac cgcgagactt ctggcaattt agagcaacta
901 ctccttgctg ttgtgaaatc tattcgaagt atacctgcct accttgcaga gaccctctat
961 tatgctatga agggagctgg gacagatgat cataccctca tcagagtcat ggtttccagg
1021 agtgagattg atctgtttaa catcaggaag gagtttagga agaattttgc cacctctctt
1081 tattccatga ttaagggaga tacatctggg gactataaga aagctcttct gctgctctgt
1141 ggagaagatg actaa，我想将ANX A5扩增出来，设计了上游引物（酶切位点为BamHI)为cgg gat cca tgg cac agg ttc tca gag gca,下游引物（酶切位点为XhoI)为ggc gag ctc tta gtc atc ttc tga gct ttc tta ta.开始时我作了几次扩出来的都是质粒，后来我把含ANX A5的上述质粒用EcoRI和SalI（原来的酶切位点）将ANX A5切了下来，以此为模板再作PCR,可连续几次什么都没有。我用的酶是TOKARA公司的Premix，在此请各位高手帮我分析一下为什么会这样，原因出在哪里，不胜感激！