走过路过，看看我的PCR

1 ccgcttagac aatgccccgg agccgccaga ccgtcgcgcc cctgccccat cgtagtatat
61 gagctcgcct acacaaggac ccccgctaaa agccagagct cccagtcccc gaggcttgaa
121 gacggggact cccttctcca ccaactctgt cctcgggggg tggggcccca gccgagatca
181 cagcgcgaca ggagtggggg tggccgctgg agacaggtga agaaacaaga aaactaagaa
241 atccgagcgg ttggaggggg agtctgtgtg gatgggatgg ggacgccggg ggaggggctg
301 ggccgctgct cccatgccct gatccgggga gtcccagaga gcctggcgtc gggggaaggt
361 gcgggggctg gccttcccgc tctggatctg gccaaagctc aaagggagca cggggtgctg
421 ggaggtaaac tgaggcaacg actggggcta cagctgctag aactgccacc tgaggagtca
481 ttgccgctgg gaccgctgct tggcgacacg gccgtgatcc aaggggacac ggccctaatc
541 acgcggccct ggagccccgc tcgtaggcca gaggtcgatg gagtccgcaa agccctgcaa
601 gacctggggc tccgaattgt ggaaatagga gacgagaacg cgacgctgga tggcactgac
661 gttctcttca ccggccggga gtttttcgta ggcctctcca aatggaccaa tcaccgagga
721 gctgagatcg tggcggacac gttccgggac ttcgccgtct ccactgtgcc agtctcgggt
781 ccctcccacc tgcgcggtct ctgcggcatg gggggacctc gcactgttgt ggcaggcagc
841 agcgacgctg cccaaaaggc tgtccgggca atggcagtgc tgacagatca cccatatgcc
901 tccctgaccc tcccagatga cgcagctgct gactgcctct ttcttcgtcc tgggttgcct
961 ggtgtgcccc ctttcctcct gcaccgtgga ggtggggatc tgcccaacag ccaggaggca
1021 ctgcagaagc tctctgatgt caccctggta cctgtgtcct gctcagaact ggagaaggct
1081 ggcgccgggc tcagctccct ctgcttggtg ctcagcacac gcccccacag ctgagggcct
1141 ggccttgggg tactgctggc caggggtagg atagtatagg aagtagaagg ggaaggaggg
1201 ttagatagag aatgctgaat aggcagtagt tgggagagag cctcaatatt gggggagggg
1261 agagtgtagg gaaaaggatc cactgggtga atcctccctc tcagaaccaa taaaatagaa
1321 ttgacctttt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a
我要扩增的得到基因的CDS（277-1134）全长，然后让其在PCDNA3.1载体上表达。
上游引物是ACC ATG GGG ACG CCG GGG GAG GG 23bp
下游引物是 TCA GCT GTG GGG GCG TGT GCT 21 bp
已经扩了好多次，退火温度试过55，58，60，65，70度TOUCH-DOWN PCR也做过了，都没有大小为八百多的目的基因，但是在100bp的位置有比较亮的条带。
内对照能扩出来，产量中上。
哪位能指点一下，我下一步应该怎么做？
要是需重新设计引物的话，怎么才能优化呢？