关于 RT－PCR 的 RNA 提取

用飞捷的试剂盒试试，15分钟搞定，当然组织可能稍微费时一点。

提取组织RNA比较方便的方法是，先将新鲜的组织剪成小块，不要太大，然后用铝箔纸包好放到液氮中，开始提取RNA的时候取出一块，立即用小榔头将组织块砸碎，这时候组织块已经成为粉末了，最后打开铝箔纸将组织粉末倒入EP管，接着按照你的方法提取RNA。当然这些过程中的材料都需处理防止RNA酶污染。 还有一个方法可以将小块组织从液氮中取出研磨，边研磨边放入液氮，研磨的效果也很好，但就算操作起来比较麻烦，也不安全，还要两个人协作。

rna酶不但环境里到处都是而且组织里也有啊 所以 第一 一定要在低温，也就是液氮或者冰上操作，可以抑制内源性的酶，这是最重要的也是最容易忽略的 第二，提取是一定要研磨的碎一些不然有的组织很不好破坏的，最好的方法就是组织匀浆 第三，就是你对组织是不是取材的时候就保存在液氮里了，这是前提！！ 好了，你返工吧

我是直接将组织放在trizol里面保存在-70，用的时候用超声粉碎机在trizol中打匀，后能抽出rna，分光光度检测能到2.0的，做realtime也有结果的

本人做过，结果很好，现将心得奉献出来： 1.器具的消毒一定要严格，金属的300度烤3h以上，EP管用DEPC水充分浸泡后高压蒸汽消毒。 2.尽可能在低温下操作，动作要快。（动作慢会增加RNA酶污染机会） 3.严格无菌操作，

我的经验就是最重要的是避免RNA降解 因此前期DEPC处理一定要充分 提取过程中，口罩手套必不可少，尽量不要说话，不要在空气流动大的地方抽提 动作一定要快，时间越长被降解可能性越大，特别是在前期，因为前期没要加入RNA酶抑制剂 对于组织事先要剪成小块，我一般是直接在研钵里加液氮研碎 注意组织会很硬不要研出来了 研磨过程一定要充分，这一定很重要，否则提取RNA效率会很低 我用的是Takara（一个大铁桶装着那种）提取

Trizol法就很不错，一是不要说话，而是不要用手摸EP管壁，要经常换手套和带口罩，注意一点，不用DEPC泡也能做出来的

动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。 用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。 1、将组织在液N中磨成粉末后，（细胞株培养，离心收集）再以50-100mg组织（细胞)加入1ml Trizol液研磨， 注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡 离心管15秒。 3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟 4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀, 4℃下7500g离心5分钟。 5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分， 否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。 RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。 2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上， RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。

我以前也是这样提RNA的，但来国外后，跟别人学了新的方法，发现效果很好，而且操作简单。新鲜样品直接放入TRIZOL，然后马上用机器粉碎，粉碎后的再放在-80. 不用研磨，不用放液氮，简单多了，而且RNA质量很好。我跑多gel的，都是非常好的2：1. 这是我目前知道的最方便质量最好的提RNA的方法了。