如何排除RT－PCR

结合个人实验，我觉得有两种方法可以佐证 （1）如果你的正反向引物或只有一侧的引物可以设计在EXON的边缘，你可以在设计时，让一个引物的一部分跨过一个内含子，这样从DNA上是拉不到产物的，只有从CDNA上可以得到。 （2）验证是否存在DNA污染，你也可以用其他已知基因的引物从DNA和CDNA拉出片段的差异来看你的模板中是否有DNA 你可以结合验证，另外DNase消化时要充分

如果你的经费充裕的话，可以购买偶联有oligo-dt的层析柱，将提取的总rna过柱子，将mrna提纯出来，这样就可以了。很好用的！！！祝成功！！

要验证所提取的RNA中是否有DNA污染，根本不用重新设计引物或找其他的引物。 方法很简单，你可以直接用提取的RNA为模板来扩增，如果能扩增出条带，说明RNA中肯定有DNA污染；如果不能扩增出条带，那说明没有DNA污染。当然，前提是用你的引物和PCR反应体系能从你的反转录产物中（有无DNA污染都无所谓）扩增到大小正确的目的条带，也就是说必须保证你的引物和PCR反应体系是work的，而且扩出的条带不应该是由于污染造成的（即不加反转录产物的对照不能扩出条带）。 虽然RNA电泳也能大概判断有无DNA污染，但如果污染的DNA比较少的话，那RNA电泳就无能为力了。

zcjia说的验证很直接，但有污染的话，还是需要处理，用其本身跨内含子的一侧或正反向引物可以不用考虑污染的问题，我们这么做效果比较好