材料与仪器
步骤
基本方案
材料
待 测 单 个 核 细 胞(肝素抗凝血或肝素抗凝骨髓)或 外 周 血 单 个 核 细 胞(单 元 8.1)或者单核/巨 噬 细 胞(单 元 8. 5 , 推荐采用阴性分选)
PBS
PBS/肝素:含 0.1% (V/V ) 肝 素 的 PBS
阻 断 IgG,浓 度 3 mg/ml (如正常小鼠 IgG, Caltag)
荧光素标记的单克隆抗体(表 6. 3. 2)
E M A (Ethidium monoazide) 溶液
A C K 裂 解 液(新鲜配制,室温保存应< 1 2 h)
7 2 % (m /V ) 甲醛
12m m X 75m m 试管
15m l 锥 底 塑 料 离 心 管(Falcon)
低 功 率 白 炽 灯(如 40W 白炽灯)
Sorvall R T 6000B 离心机和转子
la. 使用肝素抗凝血或抗凝骨髓时:在 15m l 锥底塑料离心管中加入约 IOml 抗凝血或1〜3ml抗凝骨髓, 4℃, 1500g离心 3min。弃血 浆 ,加入 1 〇ml PBS/肝素,盖紧
来源:丁香实验