MTT法检测单核-巨噬细胞胞毒作用
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MTT 法检测单核-巨噬细胞胞毒作用
单核-巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要的作用,因此,检测单核-巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。下面介绍几种常用的单核-巨噬细胞功能的检测方法。
【试剂及材料】
(1) LPS
(2) 靶细胞(L929,K562或LL937)
(3) MTT(5mg/ml)
【操作方法】
(1) 取手术切除的脾脏,分离单个核细胞,采用粘附法获得脾Mφ或采用Percoll离心沉淀法分离外周血Mφ,调整细胞浓度至5×105 /ml;
(2) 将脾或外周血Mφ加入96孔板,每孔0.2ml,分别加LPS (终浓度为10μg/ml)置37℃,5%CO2 培养箱中培养48h;
(3) 加入靶细胞(效靶比为10:1)作用48h;
(4) 于终止培养前,每孔加入MTT 10μl,混匀后再培养4~6h;
(5) 吸弃上清液,每孔加入溶剂(DMSO)100μl,稍振荡待甲肷产物充分溶解;在酶标仪上,测定OD560nm ;
【结果分析】
细胞毒性百分率按下列公式计算:
细胞毒性百分率
|
= (1 -
|
ODE+T-ODE
|
) ×
|
100%
|
ODT
|
ODE+T=效应细胞孔OD值+靶细胞孔OD值
ODE=相应浓度单独效应细胞的OD值
ODT=相应浓度单独靶细胞的OD值