原理
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
材料与仪器
细胞
D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶
净化工作台 离心机 恒温水浴箱 冰箱 倒置相差显微镜 培养箱 吸管 玻璃瓶 培养瓶 废液缸 吸头 枪头 胶塞 离心管 量加样枪 红血球计数板
D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶
净化工作台 离心机 恒温水浴箱 冰箱 倒置相差显微镜 培养箱 吸管 玻璃瓶 培养瓶 废液缸 吸头 枪头 胶塞 离心管 量加样枪 红血球计数板
步骤
一、接种细胞
1. 用0.08%胰蛋白酶消化单层培养细胞。
2. 用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液。
3. 以每孔103～104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200 ul。
1. 用0.08%胰蛋白酶消化单层培养细胞。
2. 用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液。
3. 以每孔103～104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200 ul。
二、培养细胞
1. 将培养板移入CO2孵箱中。
2. 在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下培养。（培养时间取决于实验目的和要求）
三、呈色
1. 每孔加入MTT溶液（5 mg/ml）20 ul，37℃孵箱中继续孵育4 h。
2. 终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。
3. 对于悬浮生长的细胞，需离心（1000 rpm，5 min），然后弃去孔内培养液。
4. 每孔加入150 ul DMSO，振荡10 min，使结晶物充分溶解。
四、比色
1. 选择490 nm 波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。
2. 以时间为横轴，光吸收值为终轴绘制细胞生长曲线。
注意事项
1. 选择适当的细胞接种浓度。在进行MTT试验前，对每一种细胞都应测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，然后确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间。
2. 避免血清干扰，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行试验。
3. 设空白对照，与试验平行设不加细胞只加培养液的空白对照孔。最后比色时，以空白孔调零。
来源：丁香实验
