H33342释放法检测单核-巨噬细胞的胞毒作用
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实验试剂
实验设备
2. 用自动微量荧光分析仪(Micro-FluoDynatech)
实验材料
实验步骤
1. 从单个核细胞中采用粘附法分离的单核细胞，经非特异性酯酶(ANAE)和台盼蓝染色，细胞纯度应>90％，细胞活力应>95％；
3. 加入终浓度为10μmol/L的H33342，置37℃标记2h；
4. 用DMEM液离心洗涤3次，重悬浮于完全DMEM培养液中；
5. 将效应细胞和标记的靶细胞按一定比例(一般为20-50∶1)加入96孔圆底培养板200μl/孔，作3个复孔；置37℃5％CO2 温箱培养20h；
6. 离心后从每孔取150μl上清液，分别加至微量荧光"W"测量板；
7. 用自动微量荧光分析仪(Micro-FluoDynatech)测定3孔的OD值，求得平均值。激发波长为360nm，发射波长450nm。每次试验同时作下列对照:自发释放值:测定单独培养的靶细胞上清液荧光强度。最大释放值:测定靶细胞用1％Triton X-100裂解后的荧光强度。
