香菜啵啵耶
7ml血,分离PBMC后,再磁珠分选为单核细胞,铺12孔板,贴壁后,加50ng/ml M-CSF,三天后换液,大部分都飘了,M-csf不是诱导贴壁的吗?为什么飘了那
dxy_ft9j5jz
你好请问解决了吗?我也感觉我提出来当天贴壁效果很好,加药M-CSF 25 ng/mL 24小时以后反而飘了一些
sswei
三天后细胞飘了,那说明细胞生活状态比较不好或者细胞死亡了。这可能是由于细菌污染引起的,由镜检观察视野中是否有杂菌判断。
loveliufudan
在您的实验中,可能是M-CSF的浓度和时间不够合适,导致细胞分化和增殖不良,从而出现细胞飘离的现象。
为了解决这个问题,您可以尝试优化M-CSF的浓度和时间。通常情况下,M-CSF的浓度可以在10-50 ng/ml之间,时间可以从3天延长至5-7天。此外,您可以添加一些细胞外基质如胶原蛋白或凝血素等,以帮助细胞贴壁并促进巨噬细胞的增殖和分化。
另外,您也可以尝试使用其他的巨噬细胞诱导因子如GM-CSF或IL-4等,或将M-CSF与这些因子一起使用,以提高巨噬细胞的分化和增殖效率。
土井挞克树
贴壁24h以后再换液,早期不稳定