【求助】TGFb诱导EMT的血清问题
丁香园论坛
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大家好！最近我在做EMT 方面的研究，遇到一些问题，请大家给点意见。
在TGFb诱导细胞EMT的试验中，有的文章是在无血清培养基中进行的，有的则是在10％FBS培养基中进行的。相信大家看文章都会发现这一点。不知两者有何利弊？请高手分析一下！万分感激。
在TGFb诱导细胞EMT的试验中，有的文章是在无血清培养基中进行的，有的则是在10％FBS培养基中进行的。相信大家看文章都会发现这一点。不知两者有何利弊？请高手分析一下！万分感激。
其实大多数TGFb诱导EMT实验中，所谓的无血清培养基都是包含0.5%FBS的培养基。严格的EMT要排除细胞增殖对实验的影响，往往需要细胞生长至汇合后，加入TGFb进行诱导，诱导时间一般都超过72小时，甚至更长，如果没有任何生长因子存在的话，细胞的状态往往受到很大影响，而加入0.5%的FBS可以保证细胞不死，又不至于引起细胞的增殖。
很有道理！万分感谢！请问10％FBS和FBS-free对结果有影响吗？
如果细胞能够长时间耐受FBS-free的话，当然更好，这样可以更准确的反应TGFb的诱导作用。
10%FBS肯定会对实验造成影响，因为很难排除究竟是TGFb还是FBS对细胞的影响，以及FBS对TGFb可能产生的协同作用。
当然我提到的是采用单纯的生长因子诱导EMT的情况下，其他情况就不是这样了，例如过表达一个基因如snail，观察其对细胞EMT的影响，这种情况就不能FBS-free了。
10%FBS肯定会对实验造成影响，因为很难排除究竟是TGFb还是FBS对细胞的影响，以及FBS对TGFb可能产生的协同作用。
当然我提到的是采用单纯的生长因子诱导EMT的情况下，其他情况就不是这样了，例如过表达一个基因如snail，观察其对细胞EMT的影响，这种情况就不能FBS-free了。
受益匪浅！很有道理！非常感谢！
在诱导TGFb诱导之前，一般是血清饥饿24或48小时，再加TGFb。请问血清饥饿的目的是什么？去除血清影响还是使细胞周期同步？24h或过夜可以吗？
下一步，我打算血清饥饿24h, 之后换成0.5％FBS培养基含TGFb, 诱导3天。不知这样是否会更好？
十分感谢！
下一步，我打算血清饥饿24h, 之后换成0.5％FBS培养基含TGFb, 诱导3天。不知这样是否会更好？
十分感谢！
饥饿后诱导更好。饥饿的主要目的是细胞饥饿后会对刺激变得更加敏感，更容易诱导成功，因为有一种观点是：细胞经过饥饿后其位于细胞膜表面的受体增多，内吞的减少，而且饥饿后很多信号通路处于关闭状态，这个时候加入生长因子如TGFb，细胞往往对刺激变得更加敏感。不仅仅是诱导EMT，在其他实验中为了观察某一生长因子对细胞的影响，往往也采取饥饿后再刺激。
个人觉得饥饿24小时已经可以了。
个人觉得饥饿24小时已经可以了。
好的！非常感谢！
我也要做用TGF beta1 做EMT诱导膀胱癌上皮间质化这个实验，请问TGF beta1是抗体还是从组蛋白之类的东西我在 R&D上看到很多种不知道用哪个，有没有具体的货号 或者叫法，能让我直接和厂家订 谢谢
也觉得无FBS培养基好，干扰少。另外，TGf-b一般指游离的那个著名的因子，不是受体，也不是抗体。通常必须用进口的。
zfv2007 wrote:
饥饿后诱导更好。饥饿的主要目的是细胞饥饿后会对刺激变得更加敏感，更容易诱导成功，因为有一种观点是：细胞经过饥饿后其位于细胞膜表面的受体增多，内吞的减少，而且饥饿后很多信号通路处于关闭状态，这个时候加入生长因子如TGFb，细胞往往对刺激变得更加敏感。不仅仅是诱导EMT，在其他实验中为了观察某一生长因子对细胞的影响，往往也采取饥饿后再刺激。
个人觉得饥饿24小时已经可以了。
传代没试过，因为血清浓度很低，而且TGFbeta本身对上皮细胞的生长有一种抑制作用，细胞一般不会增殖；
zfv2007 wrote:
传代没试过，因为血清浓度很低，而且TGFbeta本身对上皮细胞的生长有一种抑制作用，细胞一般不会增殖；
对TGF-β的浓度有什么要求呢？诱导成功后又能养多久？谢谢！
phy2520 wrote:
请问EMT的诱导过程详细是怎样呢？（不好意思，没接触过，知识面一片空白）
对TGF-β的浓度有什么要求呢？诱导成功后又能养多久？谢谢！
你好，我也要做这个相关的，但是很不清楚，能否问你几个问题？我的qq联系方式5626774989
请问一般使用TGF-beta的浓度是多少呢？
我也想知道。。。。
最近用TGFb诱导A549EMT 5ng/ml 无血清 加了0.1%BSA 结果细胞还是漂了一大片 感觉还是要加点血清的好 虽然会影响说服力 但这应该也是没办法的吧 加大TGFb浓度10ng/ml？？？ 再设个对照 可能会有说服力一点吧 下次再做做看 望有经验的前辈指点指点 看文献别人都是无血清做的 有的还没写加了BSA 文献都是坑爹的。。。
ryan801218 wrote:
在诱导TGFb诱导之前，一般是血清饥饿24或48小时，再加TGFb。请问血清饥饿的目的是什么？去除血清影响还是使细胞周期同步？24h或过夜可以吗？
下一步，我打算血清饥饿24h, 之后换成0.5％FBS培养基含TGFb, 诱导3天。不知这样是否会更好？
十分感谢！
请问你是直接把TGF-B加入到0.5%的培养基吗？TGF-B稀释了吗？谢谢
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