【求助】诱导凋亡后细胞如何收集与处理
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最近本人正在做缺氧复氧诱导细胞凋亡实验，实验对象为贴壁细胞，诱导完凋亡后须收集细胞提RNA和蛋白并检测一些凋亡相关酶的活性与表达，在缺氧复氧后出现大量漂浮变圆的细胞，由于我采用采用胰酶消化的方法收集细胞后提RNA和蛋白，由于消化前需将原培基倾倒掉并用PBS洗涤细胞，因此这些漂起来变圆的细胞大量丢失，请问这些漂浮变圆的细胞我需要收集吗？这些细胞的丢失对我的实验结果影响大吗？谢谢
需要收集的， 丢掉后会使你的检测结果偏低。
我觉得不应该收集
毕竟贴壁细胞离开培养皿，不好说他已经死了很久还是刚死。那么刚死的细胞内蛋白表达情况和降解情况 和 死了一定时间的细胞 有时是完全不一样的。
所以，像我个人做凋亡摸刺激浓度时会选择凋亡被启动但是细胞没有明显收缩变细的浓度和时间点。
个人意见，仅供参考
毕竟贴壁细胞离开培养皿，不好说他已经死了很久还是刚死。那么刚死的细胞内蛋白表达情况和降解情况 和 死了一定时间的细胞 有时是完全不一样的。
所以，像我个人做凋亡摸刺激浓度时会选择凋亡被启动但是细胞没有明显收缩变细的浓度和时间点。
个人意见，仅供参考
请问楼主你的缺氧实验是如何进行的，使用低氧培养箱吗？氧浓度能降到多少？作用多长时间？谢谢！！
用低氧培养箱，氧浓度为0，缺氧24小时。
收集漂浮细胞后结果很好，相关指标检测都比不收集好。
einstan001 wrote:
收集漂浮细胞后结果很好，相关指标检测都比不收集好。
建议您回头发论文的时候, 万一reviewer问起不要回答您把上清中的细胞也一起提了.
呵呵，just collect cell
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