胶条处理

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胶条

用于2-DE 时，胶条应该散于重泡胀池（图 3, ld) 中在含 5mol/L 尿素的溶液（或2mol/L 硫脲和 5mol/L 尿素）中泡胀。溶液其成分为 0,5% 到 4% 非离子（NP-40,Triton X-100) 或两性 (CHAPS) 去污剂、 15mmol/LDTT 和 0.5% 适宜范围的 pH 值的SCA。然后将胶条直接放在水平平板电泳装钮的冷却板装面 (图 3.lg) 。另外一种便利的方法是用 Phsmiaria 公司的泡胀托架（图 3.lh), 这种托架用波纹塑料板塑造，上面所含的凹槽正好适于 IPG 的排列摆放。此外，该设备配备有带有电极条和框架 (bar) 以及配备加样杯的支架。 可以在胶条表面任意位置加样。必要时，可以将托架用硅油覆盖，以在 IEF 时保护胶条使之不受大气影响。在 2-DE 图谱碱性端常可以见到水平条纹，特别是当在一向使用碱性 IPG 梯度时，在 IPG 胶表面沿阴极区额外叠加一个用 20mmol/L DTT 浸泡过的电极条，可以解决这个问题。该方法的优点是， IEF 时胶内 DTT 向阳极迁移，从阴极区外加电极条释放出来的 DTT 可以不断进行补充。另外一种避免阴极区条纹的方法是利用不带电荷的还原剂 TBP, 它在 IEF 时不发生迁移，已发现在 IEF 中 TBP 可以大大提高蛋白质的溶解能力，特别是羊毛蛋白。

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