24cm IPG胶条二维电泳
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实验步骤
1. 清洗器具用品：清洗所有的干胶条套件，包括胶条槽、盖片、托盘等。用Ettan IPGphor胶条槽清洗剂(Amersham Biosciences.)，并用大量去离子水冲洗，自然干燥备用。
采用再水化同时上样的方法。低电压再水化的步骤编为利用Ettan IPGphor进行电泳的第一步，再水化时间为12小时。
2) 设置等电聚焦电泳条件：在Ettan IPGphor等电聚焦设备上采用再水化同时上样方法进行IPG等电聚焦。再水化和等电聚焦温度均为20℃，电流最强上限为每胶条50uA，再水化时间12h。
第二步平衡：用含碘乙酞胺的平衡溶液(不含DDT)进行第二步平衡，在每10mlSDS平衡缓冲液中加入250 mg碘乙酰胺。
1) 配胶：12.5%均一SDS聚丙烯酰胺凝胶，单块胶总量100 ml。
5) 电泳条件：起始设置2 W/gel，1 h；5 W/gel，1 h；然后以恒定功率15 W/gel，4-5 h，当澳酚蓝指示条带达胶面底端时结束电泳。
取出凝胶板，剥胶，置于存有染液的托盘内在摇床上轻轻摇动。采用银染方法。
1) 固定：凝胶置于固定液中(乙醇200 ml、乙酸50 ml、加去离子水至500 ml ) 1小时；
2) 敏化：换敏化液(硫代硫酸钠1 g，醋酸钠34 g、去离子水至350ml、乙纯150ml)敏化30 min；
4) 银染：置于银染液(硝酸银溶液1.25 g，加去离子水至500mI)中染色20分钟；
6) 显色：加显色液(无水碳酸钠12.5 g加去离子水至500 ml，临用前加甲醛200ul)，至蛋白点完全清晰显现，背景干净时为止。约5-10分钟；
7) 终止二倒出显色液，立即换终止液(乙二胺四乙酸二钠7.3 g，加去离子水至500 ml ) 10 min，终止显色；
6. 凝胶扫描及结果分析：用UMAX扫描仪对凝胶进行扫描，并用Image Master 2D 5.0分析软件对图像进行分析。
注意事项
1. 戴手套清洗，不用手接触胶条槽。胶条槽在使用前必须完全干燥。
2. 将所有凝胶模具(电泳槽、玻璃板、厚玻璃板、塑料薄片)、试管、染色用托盘和量筒用去污剂软刷刷洗(用力擦，把胶渍擦干净)，避免其他蛋白质污染和以往实验残留物。去离子水反复冲洗两遍，自然干燥。
