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为什么我的二维电泳跑出来感觉分辨不到目标蛋白。

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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3 个回答

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于小鱼鱼1998

有帮助

考虑是目标蛋白可能分子量太大了,这个时候要调整电泳相关参数

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dxy_mqg1dtg8

有帮助

可能有以下几个原因:

1.蛋白样品的复杂性:如果样品中含有大量蛋白质,其中一些可能具有相似的分子量和等电点,会导致分辨率降低。在这种情况下,可以尝试使用高分辨率的凝胶或者采用其他的蛋白质分离方法,如液相色谱等。 

2.蛋白样品的预处理:二维电泳前的样品预处理对于蛋白质的分离和分辨是非常重要的。可能需要对样品进行蛋白提取、净化、浓缩等步骤,以确保样品的纯度和浓度适合二维电泳分离。此外,还需要注意避免蛋白质的降解和氧化,以及其他干扰因素的存在。 

3.等电聚焦步骤:等电聚焦是二维电泳中的第一步,它用于根据蛋白质的等电点进行分离。如果等电聚焦的条件不合适或者操作不正确,可能会导致目标蛋白无法被有效分离和检测到。在进行等电聚焦时,需要注意电极的正确放置、样品的充分溶解和加载、pH梯度的选择等。 

4.SDS-PAGE步骤:SDS-PAGE是二维电泳中的第二步,用于根据蛋白质的分子量进行分离。如果SDS-PAGE的条件不合适,如凝胶浓度、电泳缓冲液等,可能会导致目标蛋白无法被有效分离和检测到。在进行SDS-PAGE时,需要注意凝胶的制备和运行条件的优化。

 

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

那可能是出现蛋白降解或者蛋白污染了

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