【求助】我的人全血D提取DNA后跑的凝胶电泳图是怎么啦?
丁香园论坛
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:~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳,结果做了几次都出下一下的情况:
1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事?请高手指点我一下 不胜感激
2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了
以下附带我的电泳图
1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事?请高手指点我一下 不胜感激
2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了
以下附带我的电泳图
你的DNA提的没问题,但你的胶跑的有问题。
你该不会是用水配的胶吧?
感觉是胶和电泳液的离子浓度不一致导致的。
你用的是DL2000吧?建议重新做胶,再跑一次。
全血的DNA,就是普通的基因组DNA,条带一般比较大,没什么特别的。
你该不会是用水配的胶吧?
感觉是胶和电泳液的离子浓度不一致导致的。
你用的是DL2000吧?建议重新做胶,再跑一次。
全血的DNA,就是普通的基因组DNA,条带一般比较大,没什么特别的。
应该不会是dna或者marker的问题,猜测可能是与琼脂糖胶的配制有关,建议你用2%的胶,充分加热溶解后配制试试看。
你好!我以前也有过这样的情况,后面分析是:电泳时间长了些,胶有问题(如果是做了几次都是这样,那就是琼脂糖的原因了)
同意以上几位战友的看法,应该不是DNA问题,是电泳的问题。
可以这样看,如果你的Maker跑的很好,但提的DNA跑不好,就是DNA的问题。
建议你把电泳缓冲液换掉,重新做个1.5%-2%的胶,电泳时恒压90V,跑20—25min。试试看。
可以这样看,如果你的Maker跑的很好,但提的DNA跑不好,就是DNA的问题。
建议你把电泳缓冲液换掉,重新做个1.5%-2%的胶,电泳时恒压90V,跑20—25min。试试看。
最主要的是人类DNA应该很大啊 我的条带的位置是不是很不合理呢 是不是应该在加样孔附近呢?谢谢了
哪位高手跑过人类DNA的琼脂糖凝胶电泳图 能不能发给小妹看看呢 我没有见过啊
哪位高手跑过人类DNA的琼脂糖凝胶电泳图 能不能发给小妹看看呢 我没有见过啊
拜托啦 各位!
谢谢zjubell! 谢谢您!如果还有人有图帮我解答疑惑我非常感谢!
zjubell,请问您 您的maker用的是dl2000吗?您的maker最上面的条带是多大?您用的是什么试剂盒呢 是不是从人全血中提取的DNA?胶是不是1%的琼脂糖凝胶?电泳时用的电压电流多大 时间多长?您看过我这张图吗 我的maker是月牙中空的,是不是和操作有关呢?我要做AFLP跑成这样是不是有影响?
问题比较多 不好意思 谢谢您!
问题比较多 不好意思 谢谢您!
我在邮件中已经有回答你的问题。
我用DL2000,最上面的自然是2Kb,用的是qiagen的kit。是从全血中提的DNA。胶浓度忘了,一般是随意加的,量了100mlTAE,随便抖点琼指糖进去,大概1-1.3g吧。电压和电流跟型号有关系。我用100V也跑,有时候为了赶时间,直接用400V去跑。
你现在的问题并不是用什么试剂盒提DNA。
而是先把marker跑跑好。重新制胶吧。
你用的是0.5×的TBE,那你配胶用的是什么?你一直没回答这个问题
不会用水配的吧?
我用DL2000,最上面的自然是2Kb,用的是qiagen的kit。是从全血中提的DNA。胶浓度忘了,一般是随意加的,量了100mlTAE,随便抖点琼指糖进去,大概1-1.3g吧。电压和电流跟型号有关系。我用100V也跑,有时候为了赶时间,直接用400V去跑。
你现在的问题并不是用什么试剂盒提DNA。
而是先把marker跑跑好。重新制胶吧。
你用的是0.5×的TBE,那你配胶用的是什么?你一直没回答这个问题
不会用水配的吧?
我称的是0.3g的琼脂糖 放入30ml的0.5x的TBE 加热后制成1%的琼脂糖凝胶 谢谢您
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