原理
IPG IEF 胶用 Immobilines制备。 lmmobilines 是拥有![]()
结构的8 种丙烯酰胺衍生物系列，其中 R 包含羧基或叔氨基团，它们构成了分布在 pH3-10 不同值的缓冲体系。根据公布的配方估算后，将适宜的 IPG 试剂添加至混合物中用于凝胶聚合，在聚合中，缓冲基团通过乙烯键共价聚合至聚丙烯酰胺骨架中，形成 pH 梯度。通过这种方式生成的 IPG, 不会发生电渗透作用，因而可以进行特别稳定的 IEF 分离，达到真正的平衡状态。
材料与仪器
蛋白样品
步骤
将所需 pH 范围的 IPG 平板胶在 GelBond PAGfilm (图3. lb) 上聚合，之后，凝胶用去离子水全面冲洗 (6X 10min), 浸人在 2% (m/V) 甘油中 (30min), 常温下在洁净橱中干燥，然后用塑料膜覆盖，如果凝胶不立即使用，可在-20℃ 贮存一年。用前，用切纸机从 IPG 平板胶切下所需数目的干胶条（图 3.lc) 。此外，各种 pH范围商品化的预制 IPG 胶条可购得。可用不同长度的 IPG 胶条，但要切记的是，通常分离区域越大，能分辨的蛋白质越多。 18 或 24cm 胶条通常用于高分辨分离，而短胶条 (4cm, 7rm 或 11cm) 则应用于快速筛选。有大量不同宽或窄 pH 梯度范围条件可供选用于 IPG IEF。
来源：丁香实验
