加样

样品通常是加在放置在 IPG 胶阳极区或阴极区的硅橡胶框内或特殊加样杯内（图3. lg, h), 对不同类型的样品，最好的加样位置由经验值确定。最初电压卫限制在150V 、 30min, 从而使尽队多的样品进入加样杯，然后逐渐增加电压至3500 V 。运行时间决定了几个不同的因素，包括样品类型、蛋白上样量、 IPG 胶条长度及所用 pH 梯度 因为温度低时尿素可能会结晶，IEF 应当在 20℃运行，不同的温度下在 2-DE 图谱中 此蛋白质点们相对位置会发生变化。表 3.1 中列出了一些典型的运行条件。上面的加样方法会导致蛋白质沉淀，上样量较大时 (1mg 或更多）更为显著。将IPG胶条直接在含所分析样品泡胀液中泡胀可以克服这个问题。利用该方法可以成功分离很高样品量 (>10mg), 但可能存在高分子植蛋白，极碱性和膜蛋白的选择性丢失。最近研制成功的集成化设备 IPGphoc, 简化了一向 IPG IEF。该设备的特点是可以在加样品或不加样品时在持胶器 (stcip holdc,) 中对胶条进行重泡胀、选择上样量以及随后的 IEF,、所有这些都可以在胶放入容器后设置桯序自动进行。仪器可以同时放12 个持胶器并配备珀尔帖，电了晶体管自动冷却装置，高达8000V 电压的程序化设置和l.5mA 的电源供应（图 3. li), 表 3.2 列出一些利用 IPG phor 的典型的 IPG IEF 运行条件。在重泡胀时加低电压可以提高高分子质量蛋白质的渗入效率。