一、血液样本的收集和处理

1. 全血

取新鲜血液加入到盛有抗凝剂的管中，轻轻颠倒混匀，充分抗凝，得到全血样本，置于冰上待测。

2. 血清

取新鲜血液，室温条件下静置30 min，待血液凝结，2000×g离心10 min，取上层淡黄色澄清液体即为血清，置于冰上待测。

3. 血浆

取新鲜血液加入到盛有抗凝剂的管中，颠倒混匀，充分抗凝，1000-2000×g离心10 min，取上层淡黄色透明液体即为血浆，置于冰上待测。

注意事项：

①抗凝剂的选择：根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。生化实验一般建议用肝素抗凝。

②样本保存：全血样本收集好后，若不能当天检测，4℃可保存1-2天。血清、血浆收集好后，若暂时不测定，可分装冻存备用，避免反复冻融，一般4℃可保存一周，-20℃可保存半个月，-80℃可保存一个月。特殊指标对样本有较高要求除外。

二、组织样本的收集和处理

1. 10%动物组织匀浆

取0.02-0.2 g新鲜动物组织块，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）漂洗，去除血液，滤纸拭干，称重，放入匀浆容器中，按照动物组织重量（g）：匀浆介质体积（mL）=1:9的比例加入匀浆介质，低温匀浆。4°C，10000×g离心10 min，取上清置于冰上待测。

2. 10%植物组织匀浆

取0.02-0.5 g新鲜植物组织块，用2-8°C的生理盐水漂洗，滤纸拭干，称重，放入匀浆容器中，按照植物组织重量（g）：匀浆介质体积（mL）=1:9的比例加入匀浆介质，低温匀浆。4℃，10000×g离心15 min，取上清置于冰上待测。

注意事项：

匀浆介质：一般采用PBS（0.01 M，pH 7.4）或生理盐水（0.9% NaCl）

匀浆方式：手动匀浆、机械匀浆

手动匀浆：将样本（含匀浆介质）倒入玻璃匀浆管中，匀浆管下端插入盛有冰水混合物的容器中，将捣杆垂直插入匀浆管，上下转动研磨数十次（6~8分钟），使组织匀浆化。
机械匀浆：将已称重的组织装入EP管，加入匀浆介质，用组织匀浆机，在低温条件下，60 Hz，90 s研磨制成组织匀浆。（皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间）。

注：组织匀浆后，取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否破碎，若没有，可适当延长匀浆时间。生化实验一般不推荐用裂解液进行裂解。

样本保存：组织样本若暂时不测定，可低温冻存，避免反复冻融。一般-20℃可保存半个月，-80℃可保存一个月。特殊指标对样本有较高要求除外。制备好的组织匀浆建议不要冻存，最好当天进行测定。

三、细胞样本的收集和处理

1. 悬浮细胞

悬浮细胞可以直接离心来收集细胞沉淀，具体操作：4°C，1000×g离心10 min，弃上清留细胞沉淀。按照106个细胞加入300-500 μL匀浆介质，进行机械匀浆，充分破碎（无明显的细胞沉淀，可在显微镜下观察）。4°C，10000×g离心10 min，取上清置于冰上待测。

2. 贴壁细胞

吸弃培养液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）将细胞洗一遍，然后收集细胞（贴壁细胞的收集方式常见的有2种：胰蛋白酶处理和细胞刮收集细胞，生化实验一般建议用细胞刮收集贴壁细胞），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4），制成细胞悬液，之后处理方法见悬浮细胞。

注意事项：

匀浆介质：一般采用PBS（0.01 M，pH 7.4）或生理盐水（0.9% NaCl）

匀浆方式：手动匀浆、机械匀浆、超声破碎、反复冻融

手动匀浆：将样本（含匀浆介质）倒入玻璃匀浆管中，匀浆管下端插入盛有冰水混合物的容器中，将捣杆垂直插入匀浆管，上下转动研磨数十次（6~8分钟），使细胞破碎。

机械匀浆：将样本（含匀浆介质）装入EP管，用机械匀浆机，在低温条件下，60 Hz，90 s研磨，使细胞破碎。

超声破碎：用超声波发生器以振幅14 μm超声处理30 s，使细胞破碎；或者用超声细胞破碎仪，300 W，3~5 s/次，间隙30 s，重复4~5次。

反复冻融：用PBS溶液或双蒸水重悬细胞，再将细胞悬液进行“冷冻-融化-冷冻”循环，重复3次左右。此法会使某些酶活力受影响，因此检测细胞样本的酶活力时不推荐使用反复冻融来破碎细胞。

注：细胞破碎好以后取出部分匀浆液显微镜观察，如细胞还未破碎则延长匀浆时间。生化实验一般不推荐用裂解液进行样本处理。

四、细胞培养基的收集和处理

直接取细胞上清进行检测，如有浑浊，4°C，3000×g离心10 min，取上清置于冰上待测。

五、体液样本的收集和处理

1. 唾液样本

用清水漱口，30 min后用唾液采集器收集唾液，4℃，10000×g离心15 min，取上清置于冰上待测。

2. 尿液样本

收集新鲜尿液，4℃，10000×g离心15 min，取上清置于冰上待测。

3. 胸水样本

收集新鲜胸水加入含有抗凝剂的试管中，颠倒混匀，4℃，10000×g离心10 min，取上清置于冰上待测。

4. 乳汁样本

取新鲜乳汁，4℃，10000×g离心10 min，弃去白色上层，取中层清液置于冰上待测。

注意事项：

样本保存：体液样本收集好后，若暂时不测定，可分装冻存备用，避免反复冻融。一般4℃可保存一周，-20℃可保存半个月，-80℃可保存一个月。特殊指标对样本有较高要求除外。