【求助】单核细胞与TLR
丁香园论坛
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请教各位朋友:
Ficoll密度梯度离心法分离外周血,分出的是单个核细胞是吧,那该怎样再将单核细胞分离出呢?
用流式测单个核细胞表面的TLR与测单核细胞表面的TLR结果一样吗,差别有多大?
Ficoll密度梯度离心法分离外周血,分出的是单个核细胞是吧,那该怎样再将单核细胞分离出呢?
用流式测单个核细胞表面的TLR与测单核细胞表面的TLR结果一样吗,差别有多大?
我现在用贴壁法分离,因为CD14 microbeads 实在太贵了,但贴壁法淋巴细胞污染很严重,B淋巴细胞是半贴壁细胞但黏附的牢固性和单核细胞有得一拼。
不含血清l640 2h后,有时候不得不用胰酶把一部分淋巴细胞消化下来,然后尝试1h 后处理,但单核细胞收获很少(可能时间不够)。
完全1640培养基(含10%FBS),淋巴细胞不易贴壁,不过单核细胞贴壁时间应该也要相应加长,因为今天尝试了1h和2h后单核细胞也被一起轻而易举得吹下来了。
试验条件要一点点摸索,每个实验室条件都不一样,我曾经参照不少国外文献都不得法,收获的纯度和数量都没有记录得高,是蛮艰难得
对了,还有我发现六孔板比培养瓶更容易贴壁
不含血清l640 2h后,有时候不得不用胰酶把一部分淋巴细胞消化下来,然后尝试1h 后处理,但单核细胞收获很少(可能时间不够)。
完全1640培养基(含10%FBS),淋巴细胞不易贴壁,不过单核细胞贴壁时间应该也要相应加长,因为今天尝试了1h和2h后单核细胞也被一起轻而易举得吹下来了。
试验条件要一点点摸索,每个实验室条件都不一样,我曾经参照不少国外文献都不得法,收获的纯度和数量都没有记录得高,是蛮艰难得
对了,还有我发现六孔板比培养瓶更容易贴壁
中皿更容易贴壁
这要看你检测tlr几型受体了,有的tlr不在淋巴细胞上表达的,比如tlr2和tlr4等。
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