【求助】单核细胞与TLR

请教各位朋友：
Ficoll密度梯度离心法分离外周血，分出的是单个核细胞是吧，那该怎样再将单核细胞分离出呢？
用流式测单个核细胞表面的TLR与测单核细胞表面的TLR结果一样吗，差别有多大？

我现在用贴壁法分离，因为CD14 microbeads 实在太贵了，但贴壁法淋巴细胞污染很严重，B淋巴细胞是半贴壁细胞但黏附的牢固性和单核细胞有得一拼。
不含血清l640 2h后，有时候不得不用胰酶把一部分淋巴细胞消化下来，然后尝试1h 后处理，但单核细胞收获很少（可能时间不够）。
完全1640培养基（含10%FBS），淋巴细胞不易贴壁，不过单核细胞贴壁时间应该也要相应加长，因为今天尝试了1h和2h后单核细胞也被一起轻而易举得吹下来了。
试验条件要一点点摸索，每个实验室条件都不一样，我曾经参照不少国外文献都不得法，收获的纯度和数量都没有记录得高，是蛮艰难得
对了，还有我发现六孔板比培养瓶更容易贴壁

中皿更容易贴壁

这要看你检测tlr几型受体了，有的tlr不在淋巴细胞上表达的，比如tlr2和tlr4等。