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求助生化大佬,GST标签目的蛋白纯化时结合不上beads怎么办呢?该如何调整实验条件?

相关实验:免疫球蛋白纯化技术

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豁然开朗_华

红框中是目的条带。诱导后量并不高,上清中有,但是结合不上beads

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3 个回答

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学习是为了少犯错

有帮助

可以尝试调整结合缓冲液中的盐浓度。增加盐浓度(如NaCl) 可以有助于促进GST标签与GST beads的结合。

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loveliufudan

有帮助

可以考虑以下调整实验条件的方法:

1. pH调整:尝试调整结合缓冲液的pH值。GST beads通常在较酸性条件下具有较好的结合效果,但具体最适宜的pH值可能因实验条件而异。尝试在pH范围内进行优化,通常在pH 7.0至8.0之间。

2. 盐浓度调整:尝试调整结合缓冲液中的盐浓度。增加盐浓度(如NaCl)可以有助于促进GST标签与GST beads的结合。尝试逐渐增加盐浓度并进行优化。

3. 添加剂:考虑添加特定的添加剂,如BSA(牛血清白蛋白)或Tween-20等,以增加结合的效率。这些添加剂可以在结合缓冲液中提供额外的稳定性和促进结合。

4. 结合时间和温度:尝试增加结合反应的时间或调整温度。有时候,延长结合反应的时间或在略高的温度下进行结合可以提高结合效率。

5. 蛋白构象调整:某些目的蛋白可能在特定的构象状态下更易于与GST beads结合。通过调整实验条件,如缓冲液成分、温度和蛋白质前处理等,可以尝试调整蛋白的构象状态以提高结合效率。

6. 考虑其他纯化方法:如果GST beads的结合问题持续存在,可以考虑其他纯化方法,如亲和层析、离子交换层析或凝胶过滤等。根据目的蛋白的性质和结合偏好,选择适合的纯化方法。


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毛利小五郎的徒弟

有帮助

提高上样量可以提高gst目标蛋白的结合率。

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