【求助】western 转膜 mark转不上
丁香园论坛
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最近做wb时，转膜后mark很淡，几乎没有
转膜条件：300mA，恒流 45min，分子量大小40kd
丽春红染膜后，条带很淡
转膜液配方：Tris 5.8g，甘氨酸2.9g,甲醇200ml/L,补足液体(去离子水)至1000ml
请高位高手指点
转膜条件：300mA，恒流 45min，分子量大小40kd
丽春红染膜后，条带很淡
转膜液配方：Tris 5.8g，甘氨酸2.9g,甲醇200ml/L,补足液体(去离子水)至1000ml
请高位高手指点
有图吗？
没有SDS?
还有1g SDS
我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml
不知道是否能对你有用
不知道是否能对你有用
配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果很好，你可以试试。希望对您有帮助！
我们实验室用的电转液配方：
Tris 20mM 2.4g
glycine(甘氨酸) 150mM 11.5g
甲醇（分析纯）20% 200ml
dd H2O 800ml加至1000ml
电转条件：200mA 2小时。
电转液4℃保存，可以重复利用3-4次,每次用前补充点甲醇，每1000ml补充10ml甲醇吧。
一直这么做，电转很稳定。
Tris 20mM 2.4g
glycine(甘氨酸) 150mM 11.5g
甲醇（分析纯）20% 200ml
dd H2O 800ml加至1000ml
电转条件：200mA 2小时。
电转液4℃保存，可以重复利用3-4次,每次用前补充点甲醇，每1000ml补充10ml甲醇吧。
一直这么做，电转很稳定。
转膜缓冲液有问题，我用的转膜液：Tris:3g, 甘氨酸:14.4g,甲醇: 200ml.
你的转膜时间太短了，我一般用300mA 转一个半小时。
你的转膜时间太短了，我一般用300mA 转一个半小时。
首先可以肯定的是40kd，300mA转45min是一定能转上的！转膜液也是没有问题的！条带很淡是否是你本身的样品浓度很稀？Mark转不上是否Mark本身有问题！转膜液我们都是这样配，一直没问题的！还有丽春红染色是与你丽春红的浓度和时间有关！
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