手把手教你玩转 WB 和蛋白纯化,给大家全面梳理 WB 的基本原理、实验流程、进阶技巧和避坑指南;同时从表达体系、缓冲条件到亲和标签、纯化方法的蛋白纯化攻略,帮你拆解注意事项,提高实验效率。
亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。靶蛋白与配基的相互作用必须是特异性结合,并且在不同的结合和洗脱条件下均保持稳定。在众多亲和层析系统的选择中,我们通过哪些条件来选择合适的纯化体系呢?
Strep-Tactin®XT 纯化步骤来啦! 各位在实验室中都是怎样做纯化的呢?视频中来自IBA Lifesciences的师姐给大家完整演示了她的纯化实验流程~ 从实验前的试剂、纯化柱的准备,到纯化以及柱子的再生步骤。希望能对大家的纯化所有帮助!建议快快点赞收藏,转发给身边做纯化的小伙伴一起看哦!
当我们在实验室中使用亲和层析法进行蛋白纯化时,经常涉及到重力柱填装等操作。视频中演示了怎样使用 Strep-Tactin®XT 4Flow®填装 1ml 的重力柱。 视频中所用到的试剂: 填料:Strep-Tactin®XT 4Flow® 50%Suspension Wash Buffer: Buffer W (10x)
在哺乳动物和昆虫细胞表达系统中,目的蛋白经常分泌至细胞培养基。所以在纯化前,目的蛋白已存在于大体积培养液中。使用视频中的Wet Fred工具,搭配Strep-Tactin® 重力柱,即可轻松的从大体积培养液中纯化(Twin-)Strep-tag®融合蛋白。 利用虹吸原理,小体积的Wet Fred工具可以用在实验台、冰箱、冷室中。在使用的过程中柱子不会干燥,无需人工监督,并且不需要复杂的软件和设备