标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？

填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。

采用排除法，柱子是否有问题？洗脱液配置有无问题？蛋白标签添加是否正确？

可能是以下原因：

1. 离子交换每个梯度都洗下来目标蛋白，最大可能性是上样量过大，流速太大，建议增加清洗的体积数，减少上样量，降低上样速度。
2. 上样完洗脱前，清洗的不彻底。
3. 标签没有表达出来：
   • 可能是因为折叠构象不正确导致标签在重折叠时没有位于蛋白质分子的表面上无法与离子柱结合。
   • 标签在折叠时没有位于蛋白质分子的表面上。
4. 填料有问题，换填料。
5. PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液pH、离子强度相同。