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科研学霸天团，48小时有问必答

问新手小白，求助流式实验中的问题？

lyang556

APC英文全名：allophycocyanin；中文名：别藻青蛋白；最大吸收峰：650nm，最大发射荧光峰：660nm，适用于双激光流式仪，可被600-640nm波长的激光激发。

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问流式细胞术中出现非特异性染色除了自发荧光之外，还有哪些原因？怎么避免？

elabscience

除此之外，巨噬细胞、单核细胞等表面表达大量的FCR，会与抗体非特异性的结合，因此在对此类含有大量FCR的细胞进行抗体标记前需要先进行封闭。

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问流式细胞术中遇到的问题？

毛利小五郎的徒弟

抗体连没连荧光素，没连荧光素标签就连不上

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问请问这是什么原因呢？尼式染色一直都做不好

天一湖医者

有可能是你用的染液过期了。所以出现这种情况。

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问IgM抗体纯化

小小小小小芳

大多数IgM类抗体是优球蛋白不溶于水，故可用双蒸水透析纯化IgM。对那些溶于水的IgM类抗体可用饱和硫酸铵沉淀。沉淀后可以采用颗粒排斥层析法(凝胶过滤)进一步纯化。颗粒排斥层析(size-exclusion chromatography)法又称分子筛层析或凝胶过滤，是利用微孔凝胶分离不同大小分子的抗体，可用于样品中IgG和IgM的分离，常用于对硫酸铵粗提物的进一步纯化。通过该法纯化所得抗体可

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问切片出现非特异性染色可能原因？

balalaLy

抗体的特异性不高，或者一抗二抗以及封闭液选择的种属没有避开相同的种属，造成内源性IgG的干扰。

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问免疫组化实验中细胞、组织的形态被破坏的原因有哪些？

balalaLy

固定不及时、脱水的过程、切片、贴片不熟练，切片刀不够锋利或有豁口。染色过程中动作粗暴，干片都会对形态造成影响

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问、流式细胞检测中怎样把对照和样本的检测结果放在⼀张图中？

elabscience

上机时是不可以放在一张图中的，后期分析的时候很多流式软件都可以将多个结果叠加在一起。

2 回答66 围观

问标本必须在抗体染⾊后30分内检测吗？

elabscience

标记完成后尽快检测，放置时间过长既可能导致荧光淬灭，也对细胞状态有影响，某些指标的表达量也会变化，导致结果不准确。

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问FCM检测表达结果到底是⽤百分⽐还是MFI？

毛利小五郎的徒弟

个人认为如果有明显阴性细胞群和阳性细胞群，应计算百分比；无明显分群，仅荧光强度发生变化的应该用MFI。如果是整体峰移（或者叫单峰），那么根本不存在MFI之外的任何合理的指标，不管MFI跟其它指标吻合度如何，这就是客观数据、客观事实。

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问FL1， FL2， FL3 的区别是什么? 是指在不同位置测得的荧光?还是不同波长的荧光?这3个参数到底测的是什么

elabscience

FL1， FL2， FL3是流式的三个通道，对应3中不同波长的滤光片，用以接受不同的荧光信号，具体每个通道检测的波长范围需根据仪器配置来确定。

3 回答116 围观

问细胞膜蛋⽩变化是⽤流⽒检测好，还是要做western?

毛利小五郎的徒弟

膜蛋白的提取，好像很费功夫，提取的不好，western结果也就不可信。流式需要的抗体很少，流式能够检测阳性表达细胞的比例，western能对总的表达定量，各有有缺点

2 回答77 围观

问流式细胞术实验中，荧光弱常见原因是什么？怎么解决？

明査日月

前带现象抗体稀释过度细胞数量过多抗原本身表达弱

3 回答443 围观

问在进行免疫荧光实验中，为了获得良好的荧光效果，在染色时有什么技巧吗？

毛利小五郎的徒弟

1. 设置对照：可以使用阳性和阴性对照来确定结果的准确性，并帮助确定任何问题的来源。 2. 样品和试剂的存储：由于 IF 中所用抗体和实验样品的荧光性质，因此必须适当存储。最好将荧光抗体和经过 IF 处理的样品都保存在完全黑暗的环境中。使用琥珀色或铝箔覆盖抗体管。3. 使用适当的固定剂：醛可用于标记膜结合抗原或细胞骨架抗原，并应用于核蛋白或线粒体蛋白。醛固定后的样本需要抗原修复和打孔渗透步骤才能正

3 回答224 围观

问来自不同处理组的蛋白，测完浓度后，我是不是要将他们的浓度变成一样，然后上样时加相同体积的量就行了，对吗

疏影

是的。另外，具体的上样量还可能需要根据内参的检测结果进行细微的调整

4 回答89 围观

问机体产生的针对链球菌的抗体因为交叉反应攻击自身细胞，但既然自身本来就有这种抗原为什么还会产生抗体呢？

毛利小五郎的徒弟

“与机体某些组织抗原成分相同的外来抗原称为共同抗原。由共同抗原刺激机体产生的共同抗体，可与有关组织发生交叉免疫反应，引起免疫损伤。例如A组B型溶血性链球菌细胞壁的M蛋白与人体心肌纤维的肌膜有共同抗原，链球菌感染后，抗链球菌抗体可与心肌纤维发生交叉反应，引起损害，导致风湿性心肌炎。...”

2 回答68 围观

问流式细胞术抗体选择？

毛利小五郎的徒弟

cd44现在用的蛮多的，你可以试试这个

1 回答91 围观

问求助流式细胞术分析标本保存的问题？

elabscience

需先制成单细胞悬液，然后使用70%乙醇固定即可，可存放于4℃/-20℃，但是还是建议尽快检测，样本放置时间过长可能会导致检测时CV值过高。

4 回答909 围观

问流式细胞仪进行检测出来无明显分堆且很弥散是为什么？

juyue2010

在样品处理中对细胞造成损伤，细胞状态不佳，可以先固定一下，

3 回答707 围观

问石蜡切片做的免疫荧光，用自发荧光淬灭剂能消除自发荧光吗？

毛利小五郎的徒弟

可以消除但效果不一定好，可以试试化学法

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