心细北方
荧光微球免疫层析时,标记好抗体的微球,加在待测样品中或者点在结合垫上马上检测能够得到满意的效果,层析效果明显,但是我喷在结合垫上37摄氏度烘箱干燥后就无法释放了,加样后微球基本就仍然干在结合垫上,几乎无法显色。求助一下?
huarenqiang5
建议做一下电镜或者用粒度仪测一下粒径,到底聚集到什么程度,如果是聚集的验证,那就要在偶联的方案上做改变,比方说EDC的用量,微球的用量,偶联的过程、缓冲体系等,缓冲体系一般用MES和硼酸体系,都可以试下,另外,你跑条时的表面活性剂也要摸索下,这个很关键。还有就是你如果只是药物筛选,完全可以把荧光标记物液态保存,不必喷到样品垫上去,这样也有利于释放。
毛利小五郎的徒弟
喷的过程中样品可能有流失,而且会影响微球的接触面积,所以容易失败
loveliufudan
这个问题可能是由于以下原因引起的:
清洗问题:如果未能充分清洗结合垫,残留的阻滞剂或清洗液可能会影响荧光微球与结合垫的结合。
结合垫的pH值问题:荧光微球与结合垫的结合通常需要一定的pH值范围,因此需要确保结合垫的pH值适当,不会影响荧光微球与结合垫的结合。
喷涂均匀性问题:如果喷涂荧光微球的均匀性不好,可能会导致微球固定在一些地方,而在其他地方没有固定。这可能会导致结合垫上微球的分布不均匀,从而影响显色效果。
其他问题:例如微球的光学特性和抗体的选择等可能也会影响显色效果。
为了解决这个问题,您可以尝试以下几点:
确保结合垫清洗充分,去除阻滞剂或残留的清洗液。
确保结合垫的pH值适当。
确保喷涂荧光微球的均匀性。
尝试使用不同的荧光微球或抗体。
尝试不同的温度和时间进行烘干。
最后,建议您对每个实验步骤进行优化,并进行对照实验,以确定问题的根源和最佳实验条件。