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以下是一些可以尝试的方法来提高大分子量蛋白的转移效率:
增加电流:使用更高的电流可以加快蛋白质的转移速度。一般情况下,使用200 mA或更高的电流可以提高转移效率。
延长转移时间:由于大分子量蛋白的迁移速度较慢,需要更长的转移时间来完成转移。一般来说,大分子量蛋白的转移时间需要至少1小时或更长时间。
使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度:一些缓冲液(如Tris-Glycine)中含有特殊的离子浓度梯度,可以促进大分子量蛋白的转移。可以尝试使用这些缓冲液来提高转移效率。
选择合适的膜:PVDF(聚偏氟乙烯)膜比NC(硝酸纤维素)膜更适合检测大分子量蛋白,因为PVDF膜具有更好的耐久性和更高的吸附容量,可以增加大分子量蛋白的转移效率。
优化电泳条件:优化电泳条件可以提高大分子量蛋白的转移效率。可以尝试使用更低的凝胶浓度、增加电场强度、延长电泳时间等方法。
需要注意的是,以上方法可能需要根据具体情况进行适当的调整和优化,以达到最佳效果。同时,为了避免蛋白质降解或损失,建议在转移之前进行质量控制,如确定蛋白质的浓度和纯度,以及避免使用过期的试剂和材料。
天一湖医者
转移缓冲液中加入终浓度0.1%SDS也可以增加转移效率;或者使用优质的转移膜或使用小孔径的NC膜(0.2微米)。
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分离胶浓度不能太高尽量用10%以下的,Western转膜液的甲醇含量可以适当减少一点,促进蛋白从胶中分离
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