免疫印迹与免疫检测实验

1. 制备抗原样品，并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白，在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。 2. 电泳完成后，拆卸凝胶夹层，去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。 3. 将转移盒放入一个较大的托盘中，加入足量的能盖没整个转移盒的转移缓冲液。 4. 在塑料转移盒的底边，依次将下面物品组装转印夹层垫或海绵，一张剪切得如凝胶大小

1. 制备样品，并在小型或标准尺寸的单向或双向凝胶上分离蛋白质。 2. 准备转印膜 3. 拆卸凝胶夹层，除去积层胶。 4. 组装转印夹层： Mylar聚酯薄膜屏蔽物 3张以转移缓冲液饱和的滤纸 已平衡的转印膜 凝胶 3张以转移缓冲液饱和的滤纸 当每一组分往上堆叠时，需排除气泡。 5. 在转移夹层的顶部放置顶电极。 6

1. 将膜放入可热密封的塑料袋，加5 ml 封闭液，密封塑料袋，在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2. 用封闭液稀释第一抗体（取决于抗体和检测系统，以1：10~1：100 000稀释）。 3. 打开袋子，倾去封阻液，以稀释的第一抗体工倾代替之。在室温下持续摇动30~60 min。 4. 带着手套从塑料袋子中取出膜，放在塑料盒子中摇动着用200

1. 在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜，需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。 2. 用TTBS溶液（用于硝酸纤维素膜或PVDF膜）或TBS溶液（用于尼龙膜）稀释第一抗体。 3. 从封闭液中取出膜，放入第一抗体溶液中。于37℃缓慢摇动30 min。 4. 在TTBS或TBS中洗膜3次，毎次超过15 m

1. 在室温以PBS洗膜15 min 以去除过量的磷酸盐和Tween 20。 2. 将膜放入发色底物显迹液，条带应在10~30 min 内出现。 3. 用蒸馏水洗膜，终止反应。晾干后拍照留永久的记录。

1. 用50 ml 底物缓冲液洗膜两次以平衡膜，每次15 min。 2. 对于使用硝酸纤维素膜或PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应：膜置于Nitro-Block溶液中5 min，然后以50 ml 底物缓冲液洗5 min。 3. 将膜移入显迹液中，浸泡30 s 或5 min。 4. 取出膜，滴干水份，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠用保鲜膜将膜紧密包裹起来。